一、低温磷光分析

由于三重态寿命较长，为减小非辐射失活过程的影响，通常应在低温条件下测量磷光。液氮是最常用的冷却剂，因而要求所使用的溶剂在液氮温度下应具有足够的黏度并能形成明净的刚性玻璃体，且对分析物具有良好的溶解特性，在所研究的光谱区内没有很强的吸收和发射，并容易制备和提纯。

二、室温磷光分析（RTP)

1．固体基质表面室温磷光分析（SS-RTP)

分析物通过物理吸附或某种化学作用力被束缚在固体基质表面，增大了刚性，减小了碰撞失活的概率，在严格干燥试样的情况下限制了氧的猝灭作用，从而显示了室温磷光。

可用的固体基质（载体）的种类颇多，其中最为方便和应用最为广泛的应属滤纸，它能吸附多种化合物使之诱发室温磷光。不同型号的滤纸，其吸附能力和背景的发光程度不同，需经实验加以选择。为了减小滤纸的背景发光，以及限制磷光分析物在基质上的移动和减小氧与湿气的渗透，有时滤纸应预先处理，在实际工作时可参考有关的文献资料。

2．胶束稳定的室温磷光分析（MS-RTP)

在表面活性剂的胶束溶液中，磷光体进入胶束后，微环境和定向约束力发生变化，从而减小了内转化和碰撞能量损失等非辐射失活过程的概率，明显增大了三重态的稳定性，使磷光强度显著增大。利用这种胶束稳定的因素，在胶束溶液中，结合加入重原子微扰剂和通氮除氧的条件下，可以检测溶液的室温磷光。

环糊精是另一种常用于发光分析的有序介质。在有机的重原子微扰剂的存在下，可能形成环糊精一磷光体一重原子微扰剂的三元包合物，产生很强的室温磷光。这种方法称为环糊精诱导的室温磷光分析（CD-RTP)，它具有一定的非流动性特点，对氧敏感性差。

3．敏化室温磷光分析（S-RTP)

这种方法可以在没有表面活性剂存在的情况下获得溶液的室温磷光，用于测定一些本身不发荧光或磷光（或发光量子产率很低）、但S1一→T1系间窜越效率高的物质。分析物在被激发后经由系间窜越过程衰变至最低电子激发三重态（T1态），当有某种合适的物质（能量受体）存在时，发生了由激发态分析物（量供体）到能量受体的三重态一三重态能量转移，最后通过测量受体所发射的室温磷光而间接测定该分析物质。其能量转移的方式如下：

*D(T1）+A(S0)一→D(S0）＋*A(T1）

式中D和A分别表示能量供体（分析物）和能量受体。S0和T1分别表示电子的基态和最低激发三重态。

显然，敏化磷光的强度随着激发光强度、能量给体的浓度和摩尔吸光系数、吸收池的长度、能量给体的S1一→T1系间窜越效率、给体与受体间的能量转移效率，以及受体的磷光效率等物理量的增大而增大。对于某一具体的分析物质（能量给体）来说，敏化磷光的强度与受体的选择关系很大。受体的选择必须考虑以下三个方面：

(1)在给体的激发波长下不会使受体发生激发，而且受体在给体的激发波长范围内摩尔吸光系数要低。

(2)受体三重态的能量应低于给体三重态的能量，假如给体三重态的能量比受体三重态的能量大21kJ•mol-1，能量的逆转移反应可以忽略。

(3)在所使用的溶剂中受体的磷光效率要高。例如，常用的受体联乙酰，其敏化磷光的波长为515-520nm，可以用来检测三重态能量高于1.87×10³cm-1的分析物质。除了利用敏化磷光进行检测之外，还可以在420nm直接激发联乙酰，用于检测对其磷光有猝灭作用的分析物质。

近年来，除早已知道的1,4一二溴萘和联乙酰等很少数物质之外，已经陆续发现丹磺酰氯和它的氨基酸衍生物以及一系列萘系衍生物，在无保护性介质存在的水溶液中，只要有重原子微扰剂存在和除氧的条件下，便可以观察到室温磷光。

此外，同步扫描和导数光谱技术，同样可以应用于磷光分析法。