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液相色谱检测器

发布时间:2015-08-11 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:597

理想的液相色谱检测器应具有灵敏度高、死体积小、线性范围宽、重现性好、响应快、对所有的试样都有响应而对溶剂无响应,能用于梯度洗脱,对温度和流速波动不敏感,对试样无破坏性,能提供组分定性信息等。高效液相色谱仪还没有气相色谱仪热导和氢火焰离子化这类既通用、可靠且灵敏度较高的检测器。检测液体流动相中溶质组分比气体中组分的技术难度要大,检测器是液相色谱发展中的薄弱环节和主要挑战之一。现有检测器可分为两种基本类型:溶质性质检测器,即只对被分离组分的物理或化学特性有响应,如紫外、荧光、电化学检测器等;另一类为总体检测器,即对试样和流动相总的物理或化学性质有响应,如示差折光检测器、电导检测器等。从广义来讲,液相色谱一质谱等联用技术的各种结构分析仪器,如质谱、傅里叶变换红外光谱、核磁共振波谱仪等,均可视为检测器,只是两者之间装备有特殊设计的接口,以消除流动相对组分检测干扰。

吸收检测

1.紫外吸收(UV)检测器

这是目前液相色谱使用最普遍的检测器,几乎所有液相色谱仪都有紫外吸收检测器。其检测原理和基本结构与一般光分析仪器相似,主要由光源、单色器、流通池或吸收池、接收和电测器件组成。与一般光分析仪器的最大区别是流通池,典型的紫外吸收检测器Z形流通池,为降低死体积,池体积尽可能小,一般限制在1-10μL;为提高灵敏度,流通池光程应有一定长度,一般为2-10mm。检测器光路设计不同,可分为单光路和双光路两种类型。根据光源和单色器不同有单波长、多波长、紫外一可见分光及快速扫描等多种类型。单波长检测器常采用发射254nm的低压汞灯为光源,没有滤光片或单色器,结构简单,灵敏度较高。多波长以中压汞灯、氘灯或氢灯为光源,发射200-400nm范围连续光谱,通过一组滤光片选择所需工作波长,由于每一波长能量分布不大,其灵敏度略低于单波长检测器。紫外一可见光吸收检测器实际上是装有流通池的光度计,通过反光镜可切换的氘灯和钨灯为光源,波长范围190-700nm。通过光栅选择某固定波长或根据组分性质选择最佳波长;亦可连续或停流扫描获得组分光谱图;波长选择和扫描常使用计算机程序控制。透过光的接收元件,一般是光敏电阻或光电管,光电变换信号由微电流放大器放大,由记录系统或计算机接收、储存、显示。紫外吸收检测器只能使用无紫外吸收的溶剂为流动相,用于测定具有紫外吸收的组分。根据测定组分的摩尔吸光系数不同,最低检出量为10-8-10-12g的较宽范围。它对流动相流速波动不敏感,适用于梯度淋洗。采用紫外吸收试剂对无紫外吸收试样衍生化或间接光度技术可扩大紫外吸收检测器应用范围。

2.光二极管阵列检测器(photo-diode-arry-detector,PDAD)

这是20世纪80年代发展起来的一种新型紫外吸收检测器,与一般紫外吸收检测器的区别是进入流通池不是单色光,而是获得全部紫外波长的色谱检测信号,可提供组分的光谱定性信息。光源发出的复合光聚焦后照射到流通池上,透过光经全息凹面衍射光栅色散,投射到二百到一千多个二极管组成的二极管阵列而被检测,可同时检测190-700nm波长范围的全部信号。采用计算机程序控制、储存,二极管阵列元件可在10ms内完成一次检测,ls内可进行快速扫描采集10万个检测数据。它可绘制随时间(t)变化,进入检测池溶液吸光度(A)随波长(A)变化的光谱吸收曲线,从而获得吸光度(A)、波长(λ)、时间((t)的三维色谱图。

3.红外吸收检测器

与一般光吸收检测器光路设计相似,其吸收池窗口采用氯化钠、氟化钙等红外透明材料,透过吸收池的红外光一般以热电敏感元件接收。这种检测器可提供分子结构信息,但由于大多数液相色谱流动相溶剂都有红外吸收及窗口材料限制,其应用有限。

荧光检测器

荧光检测器(fluorescencedetector,FD)利用化合物具有光致发光性质,受紫外光激发,能发射比激发波长较长的荧光对组分进行检测。对不产生荧光的物质可通过与荧光试剂反应,生成可发生荧光的衍生物进行检测。;为避免干扰,检测器光路设计上激发光光路与荧光发射光路互相垂直。可发射250-600nm连续波长的氨灯常用作检测器光源,经透镜、激发单色器聚焦到流通池。与激发光成90°的荧光经透镜、发射单色器聚焦到光电倍增管上转变成电信号。荧光检测器灵敏度比紫外吸收检测器高2-3数量级,特别适用痕量组分测定,其线性范围较窄,可用于梯度淋洗。

三 示差折光检测器

示差折光检测器(differentialrefrativeindexdetector,RI)检测原理是基于溶质随流动相洗出形成的溶液与流动相折射率差异,其差值大小反映流动相中溶质浓度。检测器光路设计上有偏转式和反射式两种,流通池有一个参比室和检测室,二者用玻璃片呈对角线分开。经过流通池的光发生折射,检测室和参比室液体折射率相同或不同时,光偏转角度不同,到达光电转换元件上光点位置发生变化,产生大小不同的光电流,然后被放大和记录。这是一种通用型检测器,对所有物质均有响应,灵敏度一般低于紫外检测器,最低检出限为10-6-10-7g。折射率对温度和流速敏感,检测器需要恒温,不适用于梯度淋洗。

四 蒸发光散射检测器

蒸发光散射检测器(evaporationlightscatteringdetector,ELSD)是近期发展起来并已商品化的新型通用型检测器。色谱柱洗出液进入一个雾化器,在氮或空气流作用下转化成烟雾,然后通过控温的漂移管,溶剂被蒸发,分析溶质形成细小的尘粒通过一个激光束,发生光散射,在与气流成90°的方向以光二极管检测散射光,产生光电流被放大、储存、显示。这是一种对所有物质均有响应的通用型检测器,适用于梯度淋洗,其灵敏度高于示差折光检测器,最低检出浓度为5ng/25μL。

五 电化学检测器

基于电化学原理和物质的电化学性质进行检测,主要有安培、极谱及电导等几种类型,适用于测定具有电化学氧化还原性质及电导的化合物,如含硝基、氨基等有机化合物及无机阴、阳离子等,广泛应用于生物、医药学及环境试样中酚类(如儿茶酚胺)、胺类(如多巴胺)、维生素及各种药物及代谢产物。检测器具有结构简单、死体积小、灵敏度高,最低检出限达10-19等特点;使用的流动相必须具有电导性,一般只能用极性溶剂或水溶液作流动相。

安培检测器(amperometricde-tector)是使用较多的电化学检测器。是简单薄层型流通池安培检测器结构图,池体由两块机械加工的氟塑料之间夹50μm厚聚四氟乙烯垫片构成,玻璃化炭黑或石墨工作电极嵌在池壁,一般为Ag/AgCl的参考电极及铂或金辅助电极置于流通池下游,池体积1-5μL。经改进装有两个工作电极的检测他已经商品化。

电导检测器连续测定色谱柱洗出液的电导,其值取决于溶液中离子的数量、电荷及迁移率,在离子色谱中广泛应用。其结构比较简单,由50μm厚的聚四氟乙烯膜隔开的两电极片中间开一长条形孔道作流通池,池体积仅1-3μL。电极由玻璃化炭黑、铂、金、不锈钢等惰性电极材料制成,一般在电极上施加50-1000Hz,5-10V的交流电压。电压越大,电导值越大,但电压不可太高,以防止电解、氧化和还原等反应。池上装有热敏电阻以实现温度自动补偿,因溶液电导率对温度敏感,要求恒温操作,亦不适用于梯度淋洗。

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