逆流色谱（countercurrentchromatography,CCC）是一种无固相载体的液液分配色谱，分离柱为空心螺旋型或串联的直型聚四氟乙烯或玻璃管，互不相溶的两溶剂中的一相在重力或离心力作用下保留在柱内作为固定相，另一相在泵驱动下作为流动相携带试样从柱内流过，利用流体力学平衡体系两相连续、高效混合，试样中各组分基于在两相中分配系数差异实现分离。

逆流色谱起源于简单的实验室分液漏斗连续多次萃取分离。其创始人日本学者Ito发现：不互溶的两相溶剂在绕成螺旋形的小内径管子里能在重力作用下实现物质在两相间的连续分配。而当螺旋管在离心力场内转动时，随着转速的增加，两相溶剂的混合程度、分配效率、柱管利用率及溶质在固定相的保留值也随之增加。如果将待分离试样从管子入口引入，连续分配传递过程就会在柱内进行，从而实现连续的液液分配分离。基于这一原理，自20世纪60年代以来，研制出多种结构分别适用于分析或制备分离的逆流色谱仪，如液滴逆流色谱仪、螺旋管形逆流色谱仪、高效逆流色谱仪、双向逆流色谱仪等商品化仪器。与高效液相色谱仪相似，这些逆流色谱仪装配有恒流泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪或数据采集系统、收集器（制备型）等，实现连续、自动和较高效分析或制备分离。

各种不同类型CCC色谱仪最大区别是色谱柱和作用力场，如典型液滴逆流色谱仪其色谱柱系统由300-500根竖立的内径1.6mm、长60mm玻璃柱组成，各柱间以0.55mm聚四氟乙烯管连接，在重力场作用下分离；螺旋管形逆流色谱仪由于柱和旋转系统结构不同，可形成多种类型仪器。一般柱系统为内径0.4-1.2mm、长约100m聚四氟乙烯管绕在中心齿轮和传动带或旋转盘带动一个或多个可自旋的竖立轴上，轴直径5-7mm、长约45cm，旋转盘公转半径10-30cm，公转速度500-1500r/min，轴自旋速度为公转1/1-1/1000，在自旋和公旋离心力作用下保持固定相停留柱内，低、中压恒流泵推动流动相携试样通过色谱柱，实现试样在两相连续分配分离。总柱效一般为2000-10000理论塔板数。高效逆流色谱仪设计上区别于以上两种，同时利用重力和离心力场实现分离。

溶剂系统是决定CCC分离选择性的首要因素，选用溶剂系统两相应具有一定表面张力和密度差，对试样均有一定溶解度，互不相溶，易于分层。双溶剂系统由于极性固定而使用较少，通常加人第三种中介溶剂，改变其种类和用量调节两相相对极性，可使溶剂系统适应多种试样分离需要。常用溶剂系统由正丁醇、氯仿、四氯化碳、正庚烷、乙酸乙酯等有机溶剂和水，包括缓冲液或水溶性溶剂，如甲醇等组成。调节极性的中介溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷等。

逆流色谱具有如下一些特点：(1)无固相载体，消除不可逆吸附，试样回收率高，且不会发生试样成分破坏。(2)适用范围广，可采用多种溶剂系统，实现小分子化合物到生物大分子、粒子的分离，如DNP氨基酸、农药、各类抗生素药物、多肽、蛋白质、细胞、各种天然产物成分等。(3)适用分离试样容量范围宽，从微克、微升级分析分离到数克、数百毫升制备分离。尤其在制备分离方面分离效率和试样容量一般优于制备型高效液相色谱，一次操作可直接从天然产物中分离出数毫克纯组分。(4)可与质谱、红外光谱等结构分析仪器联用，实现定性、定量分析。(5)仪器柱结构系统较为复杂，操作技术较繁复，自动化水平不及HPLC等方法，是一个正在发展、有待进一步完善的分离技术。