北京普天同创生物科技有限公司
电泳结束后,我们可以进行后续的蛋白染色、蛋白转印(如将蛋白电转印到硝酸纤维素膜上),以及进一步的蛋白印迹(Western blotting)实验。这里只简单地介绍一下考马斯亮蓝和银染的基本操作步骤,其他详细内容请见下一章蛋白质染色。
考马斯亮蓝R -250染色可检查出含0. 1μg蛋白质的条带;银染的灵敏度可较考马斯亮蓝R-250高出100倍。
考马斯亮蓝R-250染色
电泳结束后,将凝胶放置于5倍体积的染色液[甲醇(或乙醇):水:冰醋酸为9:9:2 (V/V)的混合液中溶解0. 5 g考马斯亮蓝R-250]中,室温下振荡染色4h或40℃染色lh。染色结束后,回收染色液以后备用。用双蒸水冲洗残留的染色液,将凝胶浸入脱色液(组成成分见前面试剂配制内容)中,其间更换3-4次脱色液,直至背景透明,回收后的脱色液经活性炭吸附后可重复使用。图13.4为典型的考马斯亮蓝R-250染色结果。
银染
SDS-PAGE电泳结束后,将凝胶按表13.4所列步骤,对蛋白质进行银染。
重复步骤,直至凝胶背景变弱,蛋白条带显色变深为止。若要保存凝胶,则做至第8步,将胶放入保存液中即可。
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