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考马斯亮蓝R-250染色

发布时间:2015-09-14 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:1221

考马斯亮蓝R-250可非特异性地结合几乎所有的蛋白质,整个染色过程较为快速、简单,而且价格便宜。检测极限是每条带0.3-1 μg蛋白质。

含有目的蛋白的聚丙烯酞胺凝胶

考马斯亮蓝R-250染色液

脱色液:15%(V/V)甲醇/10% (V/V)乙酸(室温可保存1个月)

7% (V/V)乙酸(可选)

带盖的玻璃或塑料容器

大小适合于盛放凝胶

台式摇床

1) 从电泳槽中取出凝胶,放人塑料或玻璃容器中,容器内含有10倍凝胶体积的考马斯亮蓝R-250染色液。对于厚度不足1 mm的凝胶,在台式摇床上缓慢摇动30-60 min,厚度大于1 mm的凝胶则摇动1-3h。丙烯酰胺浓度较高的凝胶需要较长的染色时间。可将凝胶在染色液中染色过夜,染色效果不会受到影响。

2)弃去染色液,用去离子水冲洗凝胶,加入5-10倍凝胶体积的脱色液。为了加速脱色过程,可往溶液中加入脱色材料(可选)。摇动脱色,直至去除背景染色(长达24 h,如果使用脱色材料,则只需2-3 h)。必要时可更换脱色液。

3)如果要保存凝胶,可将其放入含有1-2 ml脱色液或7%乙酸的热封塑料袋或可重复密封的塑料袋内。室温可保存数周,4℃可保存数月。

4)为了永久记录,可将凝胶进行扫描或照相,或按照下述方法在干胶仪上干燥,在干胶仪上放置一块湿的Whatman 3 MM滤纸,用水冲洗凝胶后放在滤纸上,用塑料保鲜膜覆盖凝胶,然后再放置一块湿的Whatman 3 MM滤纸,在80℃干燥1-2h,或者按照干胶仪说明书操作。另一种方法是,在一个支持架上,用多孔膜将凝胶夹于中间,在工作台上将凝胶于室温干燥过夜。

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