为检测通过可诱导启动子如GALI启动子表达的外源蛋白质的半衰期，启动子关闭是常用的方法。

(1) 瞬时诱导和启动子关闭

1) 将表达目的蛋白质粒的酵母细胞，在30m1含棉子糖的完全合成培养基中培养至对数期，OD600为0.4-0. 6。葡萄糖联闭，GALL启动子。

2）加入终浓度为2％的无菌乳糖诱导基因表达30分钟。

3) 将细胞转移到50m1无菌Falcon离心管中。2000r/min离心5分钟。移弃上清。

4）用30m1无菌PBS重悬洗细胞。如步骤3离心收集细胞，移弃清。

5）用6m1含2％绵子糖和2％葡萄糖的合成完全培养基重悬细胞。

6）立即将1 ml细胞转移到一个新离心管中，作为“Time 0”组。14 000rpm离心15秒，移弃上清，将沉淀放液氮保存。

7）在预设时间（见酵母蛋白半衰期检测2步骤8)，将1 ml细胞转移到一个新离心管中，离心移弃上清并将沉淀放液氮保存。

(2) 酵母提取物的准备

(3) SDS-PAGE和免疫印迹

1) 将100-200 μg总蛋白提取物，进行SDS-PAGE，并应用标准方法进行免疫印迹分析。

2）用ECL Plus超敏发光液检测目标蛋白，用磷屏仪检测杂交膜上斑点的密度。如用ECL发光液，用X线胶片检测线性条带信号。使用显像密度计，则能获得线性范围至条带密度的信号。