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己糖胺酶消化实验

发布时间:2015-09-21 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:449

蛋白末端的β-GlcNAc和O-G1cNAc可以使用商品化的己糖胺酶去除,而这些酶也会裂解β- G1cNAc残基。与O-连接N-乙酰半乳糖苷酶不同的是,商品化的己糖胺酶具有较低的pH,一般为pH4. 0 -5. 0。

(1) 材料

1) 刀豆N-乙酰 -β-D-葡萄糖胺酶(Sigma - Aldrich , V -Labs,Covington, LA)。

2) 2%(W/V) SDS。

3) 2×反应混合液:80mmol/L柠檬酸-磷酸盐缓冲液(pH 4. 0 );

1. OU N-乙酰-葡萄糖胺酶( V - labs) ; 8 % ( V/V) Triton X-100;

0. 0l U抑肽酶;1. 0μg亮肽素;1. 0μg a2- 巨球蛋白。

(2)方法

1) 准备样品(包括阳性对照如卵清蛋白)。

2)与2% (W/V) SDS混匀(1:1)并煮沸5 min。

3)与反应混合液混匀(1:1),37℃温育4-24h。

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