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凝胶渗透净化

发布时间:2015-10-26 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:349

1.方法的适用范围

①凝胶渗透色谱法(GPC)是在合成的大分子的分离中采用有机溶剂和疏水凝胶的尺寸大小排阻方法。该填充凝胶是多孔的,并以孔度大小的范围或均一度(排阻范围)所表征。在选择凝胶时,排阻范围必须大于那些被分离的分子的范围。

②一般应用。凝胶渗透色谱法被推荐用于从样品中除去各种类脂化合物、聚合物、共聚物、蛋白质、天然树脂和聚合物、细胞组分、病毒、留族化合物和分散的高分子量化合物。

③特定应用。本法包括酚类和有机酸类、酞酸酯类、硝基芳香类、多环芳烃类、氯代烃类、碱或中性化合物、有机磷杀虫剂、有机氯杀虫剂、含氯除草剂等各种化合物的样品提取物的净化指南。

2.方法摘要

用所需量的预胀的吸附剂填充柱子,长时间用溶剂冲洗。柱经过校正后,负载以被分析样品。洗脱是用合适的溶剂以实现,随后浓缩洗脱物。

3.干扰及消除

①在使用此方法之前,对欲测定的化合物应作试剂空白。在将此法应用于实际样品之前,干扰量必须低于方法检测限。

②除本法中所述之外的其它更多的方法对试剂纯化可能是需要的。

4.仪器和设备

1)凝胶渗透色谱系统:

①色谱柱:600-700mm×25mm内径玻璃柱,适于向上流动操作。

②聚苯乙烯凝胶珠S-X3 (Bio-beads S-X3 ):每根柱70g。

③泵:在达100磅/in2压力下有0.1-5ml/min的恒流能力。

④进样器:用5m1进样管。

⑤紫外检测器:254nm(可选择的)。

⑥长图记录仪(可选择的)。

⑦注射器:l0ml。

⑧注射过滤器支架和过滤器:5gm孔径过滤器或等同规格。

2) 烧杯:400ml。

5.试剂

1) 二氯甲烷:农药级或相当规格。

2) GPC校准溶液。

① 玉米油:200mg/ml配在二氯甲烷中。

② 双(2-乙基己基)酞酸酯和五氯苯酚溶液:4.0mg/ml配在二氯甲烷中。

③ 若使用紫外检测器,用酞酸酯一苯酚溶液与玉米油混合。浓度必须保持相同。

6.样品的采集、保存和处理

7.步骤

1) 填充柱。将约70g聚苯乙烯凝胶珠放在400m1烧杯中,用二氯甲烷覆盖微球;让微球膨胀过夜(在装填柱之前)。转移膨胀的微球至柱中,并开始以5.0ml/min的速度将溶剂从底部至顶部泵入柱中。在约lh后,调整柱上压力至7-10PSi,并继续抽4h,以除去柱中空气。定期调节所需柱压以保持7-10PSi,压力不容许超过25PSi。

2)柱的校准。柱可用重量法或GC (FID)技术手动地或自动地(若应用带流动池的记录式紫外检测器)进行校准。

①手动校准:装5m1玉米油溶液至第一号样品管中,装5 ml酞酸酯一苯酚溶液至第二号样品管中。注射入玉米油并收集10 ml级分(即:在2 min间隔改变级分)达36 min。注射入酞酸酯一苯酚溶液并在60 min内收集15 ml级分。将各级分蒸发至干,然后用重量法测定残渣以测定玉米油洗脱图。用GC (FED)测定酞酸酯一苯酚级分,使用DB-5毛细管柱,紫外分光光度计,或GC-MS系统。绘出每一级分中各组分的浓度对从进样点算起的总洗脱体积(时间)。选择一个清除时间使≥85%的玉米油得以除去,并使≥85%的双(2-乙基己基)酞酸酯得以回收。在洗脱五氯苯酚后,选择收集时间以延长至少10 min。在两个样品之间用二氯甲烷洗涤柱子至少15 min。选择的典型参数是:清除时间30 min(150 ml);收集时间36 min (180 ml)和洗涤时间15 min (75 ml).

②自动校准:也可用一个254nm检测器代替级分的重量法和 GC分析。用紫外检测器时,应使用玉米油一酞酸酷一苯酚混合物。装5m1至第一号样品管中,使用与手动校准同样的标准来选择清除时间和收集时间。

③聚苯乙烯凝胶珠柱可反复使用数月,即使发生褪色仍可继续使用。每周重新校准系统一次。

3) GPC提取物净化。提取物必须在二氯甲烷中或最初就在二氯甲烷中。所有其它的溶剂都必须浓缩至1 ml,并用二氯甲烷稀释至10.0 ml。通过过滤器支架预过滤或负载所有的提取物以防止微粒可能造成流路中断或阀门损坏。装5.0 ml一等分的提取物于GPC柱上,装样时不要用过高压力。在两个提取物之间要用溶剂彻底地清洗装样管。对于特别脏的提取物,应作一个GPC空白(二氯甲烷)以作遗留物的校正。从校准中确定用清除、收集和洗涤参数来处理提取物。收集干净的提取物于400ml烧杯中,并用铝箔紧密覆盖。

注意:在GPC的装样期间,10. 0ml提取液的一半会损失。因此,当计算待测物浓度时,将样品量除以2。

4)用标准K-D技术来浓缩萃取液。参见第四篇测定方法中关于所需的最后体积。

8.质量控制

①分析者在应用此法于实际样品之前,应证明欲测定的化合物已被定量地回收。

②对于应用此法进行净化的样品提取液,有关的质量控制样品也必须通过此净化方法进行处理。

9.方法性能

参见测定方法的性能数据。

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