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滤膜法——水中粪大肠菌群的测定(B)(二)

发布时间:2015-11-02 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:1109

滤膜法

同总大肠菌群一样,粪大肠菌群的密度也可用滤膜技术来测定。如果这种滤膜技术是用于检验加氯消毒后的水样时,在使用这个技术之前,应先做实验,证实它所得的数据资料与多管发酵试验所得的数据资料具有可比性。

1.培养基

M-FC培养基。

2.步骤

(1)水样过滤

①水样量的选择:水样量的选择根据细菌受检验的特征和水样中预测的细菌密度而定。如未知水样中粪大肠菌的密度,就应按下表所列体积过滤水样,以得知水样的粪大肠杆菌密度。先估计出适合在滤膜上计数所应使用的体积,然后再取这个体积的1/10和10倍,分别过滤。理想的水样体积是一片滤膜上生长20-60个粪大肠菌群菌落,总菌落数不得超过200个。

②水样的过滤:按总大肠菌群滤膜法水样过滤的步骤和注意事项进行过滤。

(2)培养

使用M-FC培养基。培养基含或不含琼脂,不含琼脂的培养基使用已用M-FC培养基饱和的无菌吸收垫。将滤过水样的滤膜置于琼脂或吸收垫表面。将培养皿紧密盖好后,置于能准确恒温于44.5℃±0.5℃的恒温培养箱或恒温水浴中,经24h±2h培养。若用恒温水浴培养,则需用防水胶带贴封每个平皿,将培养皿成叠封入防水塑料袋或容器内,浸没在44.5℃±0.5℃恒温水浴中。在培养时间内,装培养皿的塑料袋必须用重物坠于水面之下,以保持所需的严格温度。所有已制备的培养物都应在过滤后30min内浸入水浴内。

3.计算及报告结果
粪大肠菌群菌落在M-FC培养基上呈蓝色或蓝绿色,其他非粪大肠菌群菌落呈灰色、淡黄色或无色。正常情况下,由于温度和玫瑰酸盐试剂的选择性作用,在M-FC培养基上很少见到非粪大肠菌菌落。必要时可将可疑菌落接种于EC培养液,44.5℃±0.5℃培养24h±2h,如产气则证实为粪大肠菌群。
计数呈蓝或蓝绿色的菌落,计算出每1L水样中的粪大肠菌群数。

粪大肠菌群菌落数(个/L)=滤膜上生长的粪大肠菌群菌落数×1000/过滤水样量(ml)

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