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邻二氮菲分光光度法测定微量铁

发布时间:2015-11-03 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:1775

一、实训目标

1.学会吸收曲线、标准曲线的绘制和选择波长的方法;

2.掌握721型等分光光度计的使用方法;

3.学会应用标准曲线法进行定量分析。

二、实训原理

邻菲罗啉(又称邻二氮菲)是测定微量铁的一种较好的显色剂。在pH为2-9的条件下,Fe2+与邻菲罗啉生成极稳定的橘红色配合物(1gK稳=21.3),反应式如下:

当Fe以Fe3+形式存在于溶液中时,Fe3+与邻菲罗啉也生成配位比为1:3的淡蓝色配合物,但稳定性较差,其1gK稳=14.1。故在显色前首先用还原剂(盐酸胺)将其还原为Fe2+,其反应式如下:

4Fe3++2NH2OH→4Fe2++N2O+H2O+4H+

羟胺

测定时,一般控制溶液酸度为pH为4-6。酸度高时,反应进行较慢;酸度太低,则Fe2+水解,影响显色。邻菲罗琳铁的最大吸收波长为510nm。

三、实训仪器与试剂

1.仪器

721型分光光度计;自动加液器;容量瓶;吸量管;移液管。

2.试剂

100μg/mL铁标准溶液;10.0μg/mL铁标准使用液;lg/L邻菲罗啉水溶液;100g/L盐酸羟胺水溶液(临用时配制);HAc-NaAc缓冲溶液(pH=4.5)。

四、实训步骤

1.标准系列的配制

分别吸取Fe3+标准使用液0mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL、6.00mL、7.00mL、8.00mL、10.00mL于已经编号1-10的10只50mL容量瓶中,加盐酸羟胺溶液1mL,摇匀,稍停;再分别加入HAc-NaAc缓冲溶液10mL、邻菲罗啉溶液5mL,每加一种试剂后均摇匀再加另一种试剂,最后用蒸馏水稀释至刻度,摇匀,放置15min。

2.邻菲罗啉铁吸收曲线的绘制
取上述5号瓶中的试液,用2cm吸收池,以1号试液作参比,在分光光度计中于波长440-600nm分别测定其吸光度A,并将结果填入下表。

以波长为横坐标、相应的吸光度A为纵坐标绘制邻菲罗琳铁的吸收曲线,求出最大吸光度值所对应的波长值。

3.标准曲线的绘制

用分光光度计在其最大吸收峰的波长(510nm)处,分别测定上述标准系列溶液的吸光度。用2cm吸收池,以不加铁的试剂溶液(1号)作参比。

以ρ/(μg/mL)为横坐标、相应的吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

4.试样中铁含量的测定

吸取水样25.00mL于50mL容量瓶中,按绘制标准曲线的操作,加入各种试剂显色,用蒸馏水稀释至刻度,摇匀。以不加铁的试剂溶液((1号)作参比,于分光光度计上测得吸光度Ax。由标准曲线求出相应的Fe含量ρx(μg/mL)。

5.结果计算

试样中的含铁量(μg/L)可由下式计算:

ρ(Fe)=ρx×50.00/V×1000

式中ρx——由试样的吸光度在标准曲线上求出的相应Fe含量,μg/mL;

V——吸取试样的体积,mL。

五、注意事项

(1)在显色前首先用还原剂(盐酸羟胺)将Fe3+其还原为Fe2+

(2)测定时,一般控制溶液酸度为pH为4-6。酸度高时,反应进行较慢;酸度太低,则Fe2+水解,影响显色。

(3)如果吸收池有误差,可在两吸收池中装入空白试液,测出吸收池的误差值,在测定样品时减去吸收池的误差。

(4)试样和标准曲线测定的实验条件应尽可能保持一致,最好两者同时显色同时测定。试样的吸光度要在标准曲线的线性部分,可适当调节标准系列溶液的加入量或试样的体积以满足此要求。

(5)盐酸羟胺易氧化,不宜久置,最好现用现配制;本实验要注意试剂的加入顺序不能颠倒。

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