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细菌计数——微生物学家如何培养细菌(二)

发布时间:2015-11-13 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:555

在琼脂上生长的一个菌落,其中的细胞都一样,都来自同一个母细胞。微生物学家给琼脂接种的时候,单个的细菌分散到了培养基中。培养期间,大约每隔半小时,来自接种菌的每个细胞的数目就会加倍一次,加倍所需的时间取决于菌种,一直到它们形成肉眼可见的细菌团,也就是菌落。微生物学家把菌落称为CFUs,也就是菌落形成单位(colonyformingunit),并对它们进行计数,可以在放大镜下手工计数,也可以用激光束扫描琼脂平板,电子计数。

含有几千到几百万个细胞的样本,会形成几乎连续成片的菌落,除非微生物学家在接种平板前,对样本进行连续稀释。连续稀释液形成的平板,包含的CFU在30到300个之间,它们大多数在空间上彼此分离,容易计数。微生物学家更希望平板上CFU就这么多,因为数目少于30的话,就给不出稳定精确的结果,而平板上有300或者更多CFU的时候,菌落太密,又难以数清。在菌群密集的平板上,细菌通过耗尽营养物或者分泌抗菌物质,开始抑制邻近菌落的生长。

测定液体培养物里的细菌数目,微生物学家会选用两块一模一样的平板,每个有30到300个菌落。这个例子中,接种有0.1毫升的1:10000稀释液的平板,看似有30到300个菌落。对每块平板上的CFU计数之后,微生物学家发现一块平板上有98个菌落,另一块上有138个。两块平板的平均数是118。现在,微生物学家必须通过稀释度来计算原始样本里的细菌数目了。

第一步,微生物学家用118乘以稀释度,这个例子里,是1:10000:

118×10000二1180000或者1.18×106

接种量只有0.1毫升,这就相当于把1毫升稀释到了1:10。校正这个稀释度,微生物学家用10乘以上面的结果:

10×1180000=11800000或者1.18×107

因此,原始的培养物里含有大概12侧乙个细菌。微生物学里,这么大数量的微生物颇为常见。土壤、海水、地表淡水,还有动物消化道里的细菌浓度,差不多也都能达到这个数量。

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