洗消工作也许是某些实验室或生产企业的重要工作。洗消流程是指玻璃器皿、塑料器皿、橡胶用品和金属器械在用于移液、细胞培养用液的存放、细胞培养等各种无菌操作以前，所进行的清洗、包装、灭菌等连续的操作程序。

执行这些程序进行洗消之前，有必要对清洗、包装、灭菌、存放等术语进行适当的讨论，给出它们的概念。主要洗消术语的操作目的和操作形式见表7-l。

表7-1主要洗消术语的操作目的和操作形式

洗消术语 操作目的 操作形式
清洗 去除物品内外表面的残留物 冲洗、淋洗、灌洗、荡洗酸液浸泡、碱液浸泡、清水浸泡
手动刷洗、洗瓶机刷洗、超声波清洗
包装保护物品的清洁程度和无菌程度 内包装：加载滤芯、装盒、装筒
灭菌包装：锡箔纸包扎、8层纱布包扎
灭菌杀灭物品内外表面的微生物 湿热灭菌、干热灭菌、气体灭菌、辐照灭菌

（一）清洗

清洗的目的在于采用合适的方法，最大限度地去除物品内外表面的残留物。残留物可以是无机盐、有机分子、生物大分子、微生物、细胞碎片等。

1．浸泡

浸泡的形式有酸液浸泡、碱液浸泡、清水浸泡，主要是降低残留物与待清洗物品表面的赫附力。塑料表面一般或多或少携带带电基团，容易与残留物形成较强的非特异吸附，而玻璃表面则很少形成带电基团，正因为如此，重复使用的试剂瓶通常选用玻璃试剂瓶。化学惰性的物品，如玻璃器皿，还可使用强酸洗液浸泡。

2.刷洗或超声波清洗

刷洗或超声波清洗的目的是利用机械力，最大限度地分离物品内外表面附着的残留物。

(1）刷洗根据用途和外观形状的差异，刷子可明显地区分为瓶刷和管刷。瓶刷和管刷又根据适用对象的大小不同，区分为大大小小不同的种类。

(2)超声波清洗超声波是频率高于20kHz的声波，它方向性好，穿透能力强，易于获得较集中的声能，在水中传播距离远，可用于测距、测速、清洗、焊接、碎石、杀菌消毒等。

超声波清洗的原理主要是空化现象。空化现象是指当超声波在液体中传播时，由于液体微粒的剧烈振动，在液体内部产生小气泡的现象。

超声波在清洗液中疏密相间地向前辐射，使液体流动而产生数以万计的微小气泡，存在于液体中的微小气泡（空化核）在声场的作用下振动，当声压达到一定值时，气泡迅速增长，然后突然闭合，在气泡闭合时产生冲击波，在其周围产生几千到上万个大气压力，破坏不溶性污物而使它们分散于清洗液中，当团体粒子被油污裹着而勃附在清洗件表面时，油被乳化，固体粒子即脱离，从而达到清洗件表面净化的目的。

3．关于冲洗、淋洗、灌洗、荡洗的区分

冲洗：指两端开口的器皿或开口很宽的器皿，将洗涤用水从某个方向进行的内表面冲刷。

淋洗：指容器类或两端开口的器皿的外表面用洗涤用水做的冲刷。

灌洗：指容器类器皿，如试剂瓶、离心管等，灌注洗涤用水后再倾倒出洗涤用水的操作形式。

荡洗：指注入适量洗涤用水到容器类器皿内，并使洗涤用水充分接触内表面后再旋转容器，倾倒出洗涤用水的操作形式。

4．关于每种洗涤用水清洗的目的和洗涤次数差异的理由

(1)自来水自来水洗涤的目的是最大限度地去除洗涤剂残余。合理的洗涤手法选用尤其重要，如果选用不当的洗涤手法，也许可以达到同样的清洁程度，但耗用的时间和洗涤用水的量都可能大大增加，从而增加操作成本。

洗涤次数与经验和选用的浸泡液、洗涤剂类型等有密切关系。如选用玻璃清洗剂溶液或洗衣皂溶液时，自来水洗涤10-15次就比较充分地被去除了。选用含酶洗衣粉溶液或含芳香剂的洗洁精溶液时，需要自来水洗涤20-30次才能比较充分地被去除。

(2)RO水RO水是高纯水机制备的纯化程度低的纯水，纯化程度类似于蒸馏水、去离子水。RO水洗涤的目的是最大限度地去除自来水中有机物、微生物和无机离子。当然，合理的洗涤手法选用也很重要。洗涤3-5次才能比较充分地去除自来水中的离子和有机物残留。

(3)高纯水高纯水是高纯水机制备的纯化程度高的纯水，纯化程度类似于双蒸水，往往是最后清洗阶段使用的洗涤用水。洗涤的目的是最大限度地去除自来水中有机物、微生物和无机离子的残余。当然，合理的洗涤手法选用也很重要。洗涤1-3次才能比较充分地去除RO水中的离子残留。

(4)超纯水超纯水是超纯水机制备的纯化程度很高的纯水，纯化程度类似于亚沸水或三蒸水。一般器血的洗涤不使用该级别的水。

超纯水通常用于培养用液的配制。

（二）包装

包装的目的是为了保护灭菌后物品的无菌状态，能防尘阻隔环境微生物进入已灭菌物品的内外表面。

器皿的包装分为内包装和灭菌包装两种类型。内包装是指专用包装，如棉花滤芯、不锈钢消毒筒、不锈钢饭盒等。灭菌包装指灭菌前或灭菌后进行的防护包装，需使用锡箔纸、牛皮纸、线绳、保鲜膜等材料。

注意包装与灭菌的关系，有些时候采用先包装后灭菌，有些时候则采用先灭菌再进行无菌包装。

（三）灭菌

灭菌前的干燥方式有40-50℃电热恒温干燥箱鼓风干燥、超净工作台内室温下的风淋干燥、风干柜内室温下的自然风干。

经过清洗、干燥、包装等程序处理的器皿，需要灭菌处理才能用于细胞培养。常用的灭菌方式有干热灭菌、湿热灭菌、多重消毒方法组合灭菌、气体灭菌和辐照灭菌。

1．干热灭菌

干热灭菌的条件是160℃2h，或180℃lh，利用恒温烤箱进行。灭菌时，所放器皿应沥干多余水分，有合适的包装，疏密有度摆放于烤箱内，使气流通畅。在到达灭菌温度前，务必开启鼓风使室内温度均匀。到达灭菌温度且恒定后关闭鼓风。到达灭菌时间后条件温度至40-50℃，并开启鼓风使室内温度均匀，温度降低至设定值后再开箱门取出灭菌包装。

适用的器皿包括金属制品、玻璃器皿。

配套的洗消程序是：洗涤→包装→灭菌→检验→存放。

2．高压蒸汽灭菌

高压蒸汽灭菌的条件是121℃20min，属于湿热灭菌。适用器皿包括金属制品、玻璃器皿、耐高温塑料器皿。

配套的洗消程序是：洗涤→干燥→包装→灭菌→干燥→检验→存放。

3．理化消毒方法联合灭菌

操作方法是，在预先除尘消毒的超净工作台内，利用无水乙醇和超纯水配制的75％乙醇溶液浸泡内表面l0s，沥干，转入无水乙醇浸泡l0s脱水，沥干，内表面朝上整齐摆放于超净工作台台面，利用超净工作台的风机风淋干燥，在265nm紫外线消毒状态下照射2h以上，同时紫外线作用于空气O2产生O2消毒。

由于75％乙醇和臭氧都是消毒剂，紫外线是物理消毒方法，故将此法称作联合消毒灭菌。

适用不耐高温塑料器皿，如多孔细胞培养板、培养方瓶。

配套的洗消程序是：洗涤→干燥→灭菌→无菌包装→检验→存放。

4．气体灭菌

气体灭菌使用专业的气体灭菌器进行，配套使用合适浓度的气体消毒剂。适用所有待灭菌物品，尤其不耐高温塑料器皿。

配套的洗消程序是：洗涤→干燥→包装→灭菌→检验→存放。

5．辐照灭菌

需要送至辐照中心进行处理，选用合理的辐照强度进行辐照。适用所有待灭菌物品。

配套的洗消程序是：洗涤→干燥→包装→灭菌→检验→存放。