（一）温度

哺乳动物及人源细胞培养的最适温度为35-37V，对低温耐受力比高温强。39℃以上的培养环境细胞容易受损，甚至死亡。不低于0℃时（(0-34℃)，细胞能生存，但代谢降低、分裂延缓。

（二）气体环境和pH

动物细胞培养需要O2和CO2。O2通量过大对细胞有毒害，一般使用空气中的O2含量就可以。CO2则与维持培养基的pH有关，细胞培养的最佳pH为7.2-7.4，通过缓冲系统和调节CO2含量，可维持正常pH。

开放培养要求5%CO2环境、HEPES(羟乙基哌嗪乙硫磺酸）10-50mmol/ml可防止培养基的pH变化。含Earle's缓冲系统的培养基适合于5%CO2的培养条件，Hank's缓冲系统的培养基仅含有0.35g/LNaHCO3，不能用于5%CO2的环境，若放入CO2培养箱，溶液将迅速变酸，使用时应注意。

（三）湿度和光

利用多孔细胞培养板、方瓶、培养皿等开放培养时，相对湿度应控制在95％以上。

动物细胞培养需避光，紫外线或可见光均可造成核黄素、酪氨酸、色氨酸等产生有毒的光产物，抑制细胞生长，降低其贴壁能力。

（四）影响细胞生长的其他因素

细胞接触橡胶用品，收集细胞时离心速度过大，细胞接种密度过低，细胞悬液或细胞培养物中气泡形成等，均对细胞不利，会导致细胞死亡或生长繁殖抑制。