［实验器材]

1．仪器

倒置显微镜，CO2培养箱，普通冰箱，超净工作台，低速冷冻离心机，显微数码摄影系统，微量移液器。

2．材料与试剂

(1）非无菌材料：酒精棉球，0.4％台盼蓝溶液，离心管架，血细胞计数板，记号笔。

(2)无菌材料和试剂：辅料镊,24孔细胞培养板，15m1离心管，长丝滴管，10m1刻度移液管，灭菌塑料吸嘴，10%oBS-RPMI1640培养液，10%oBS-DMEM培养液，添加有0.02%EDTA的0.25％胰蛋白酶消化液，lmol/LHC1溶液。

(3)细胞材料：悬浮细胞培养物，贴壁细胞培养物。

［操作步骤]

1．收集培养孔中的细胞，制备单细胞悬液。如为贴壁细胞需用胰蛋白酶消化后再制备单细胞悬液。适当调整细胞密度在106个／ml左右。

2．取0.5-l.0ml细胞悬液至Eppendorf管中，等量加入0.4％台盼蓝染液，染色2-3min,

3．用微量移液器吸取少量细胞悬液加入到血细胞计数板上的计数窗中。

4．显微镜下计数500个细胞，分别计数死细胞和活细胞数目，计算细胞活力。

5．结果判定。死细胞能被台盼蓝染上色，镜下可见其为浅蓝色的细胞，活细胞不能被染色，镜下呈无色透明状。

细胞活力（％）＝（总计数细胞数一着色的死细胞数）÷总计数细胞数×100%

［注意事项］

1．与台盼蓝溶液混合后的细胞悬液不可放置时间过长，因为活细胞对染料也有一定摄取能力，若时间太长，活细胞也会被染色。

2．细胞悬液和台盼蓝溶液的用量可根据实验条件及要求进行必要调整。

3．使用后要及时用酒精棉球认真清洗血细胞计数板和盖玻片，并用擦镜纸擦干后保存。