［实验器材］

1．仪器

倒置显微镜，CO2培养箱，普通冰箱，超净工作台，低速冷冻离心机，显微数码摄影系统，IVC独立送风笼具。

2．材料与试剂

(1）非无菌材料酒精棉球，离心管架，血细胞计数板，记号笔。

(2)无菌材料和试剂辅料镊，眼科镊，眼科手术剪，一次性培养皿，一次性lml注射器，6孔细胞培养板，15ml离心管，长丝滴管，l0ml刻度移液管，10%BS-RPMI1640培养液，无菌生理盐水，lmol/LHCl溶液。

(3)实验动物与细胞材料健康小鼠，荷瘤小鼠，SP2/0或S180。

［操作步骤]

1．细胞悬液准备

无菌选取生长良好的对数生长期的培养细胞，或选取生长良好的实体瘤细胞。计数并调整细胞浓度至107-108/ml,悬浮细胞使用无血清基础培养液或生理盐水，分装至lml注射器，待用。

2．腹水瘤的接种

将直接种于小鼠腹腔，使小鼠发生腹水生长。酒精棉球消毒注射部位皮毛，左下腹穿刺接种106腹水瘤细胞，约需0.lml单细胞悬液。注射腹水瘤的小鼠需用苦味酸溶液染色皮毛。正常条件饲养。

3．腹水收集

接种腹水瘤细胞后约7-12d，待小鼠腹部明显膨大，脊椎脱臼法处死小鼠。用消毒酒精浸泡小鼠5-10s，沥干，放置于超净工作台内无菌培养皿内，或放置于酒精棉球消毒的锡箔纸上。用9号针头透过腹部皮肤和腹膜直接抽取腹水。也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可获得3-5m1腹水。腹水收集于无菌离心管内。
抽取的腹水应呈乳白色。经3000r/min离心15.30min，收集上清，分装冻存备用。

4．其他

参照“实验中因正常死亡”的动物尸体处理方法，小鼠尸体装入密封袋或垃圾袋内密封移交学校动物中心或实验实训中心处理。