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生化需氧量的测定—稀释接种法

发布时间:2016-02-26 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:1335

(一)实验目的

.学会BOD5水样的采集方法。

.学会BOD5的测定方法。

(二)测定方法

1.实验原理

分别测定水样培养前的溶解氧含量和在(20±1)℃培养五天后的溶解氧含量,二者之差即为五日生化过程所消耗的氧量(BOD5)。

对于某些地表水及大多数工业废水、生活污水,因含较多的有机物,需要稀释后再培养测定,以降低其浓度,保证降解过程在有足够溶解氧的条件下进行。其具体水样稀释倍数可借助于高锰酸盐指数或化学耗氧量(COD)推算。

对于不含或少含微生物的工业废水,在测定BOD:时应进行接种,以引入能分解污水中有机物的微生物。当污水中存在难于被一般生活污水中的微生物以正常速度降解的有机物或含有剧毒物质时,应接种经过驯化的微生物。

2.仪器

①恒温培养箱。

②1000-2000mL量筒。

③玻璃搅棒棒长应比所用量筒高度长20cm,在棒的底端固定一个直径比量筒直径略小,并带有几个小孔的硬橡胶板。

④溶解氧瓶200-300mL,带有磨口玻璃塞,并具有供水封闭的钟形口。

⑤5-20L细口玻璃瓶。

⑥虹吸管供分取水样和稀释水用。

3.试剂

磷酸盐缓冲溶液将8.5g磷酸二氢钾(KH2PO4)、21.75g磷酸氢二钾(K2HPO4)、33.4g磷酸氢二钠(Na2HPO4·7H2O)和1.7g氯化铵(NH4C1)溶于水中,稀释至1000mL。此溶液的pH应为7.2。

硫酸镁溶液将22.5硫酸镁(MgSO4•7H2O)溶于水中,稀释至1000mL。

氯化钙溶液将27.5g无水氯化钙溶于水,稀释至1000mL。

④氯化铁溶液将0.25g氯化铁(FeC13·6H20)溶于水,稀释至1000mL。

⑤0.5mol/L盐酸溶液将40mL盐酸溶于水,稀释至1000mL。

⑥0.5mol/L氢氧化钠溶液将20g氢氧化钠溶于水,稀释至1000mL。

⑦c(1/2Na2SO3)=0.025mol/L亚硫酸溶液将1.5756g亚硫酸钠溶于水,稀释至1000mL。此溶液不稳定,需当天配制。

⑧葡萄糖一谷氨酸标准溶液将葡萄糖和谷氨酸在103℃干燥lh后,各称取150mg溶于水中,移入1000mL容量瓶内,并稀释至标线,混合均匀。此标准溶液临用前配制。

⑨稀释水在5-20L玻璃瓶内装入一定量的水,控制水温在20℃左右,然后用无油空气压缩机或薄膜泵,将此水曝气2-8h,使水中的溶解氧接近于饱和,也可以鼓入适量纯氧。瓶口盖以两层经洗涤晾干的纱布,置于20℃培养箱中放置数小时,使水中溶解氧含量达8mg/L左右。临用前于每升水中加入氯化钙溶液、氯化铁溶液、硫酸镁溶液、磷酸盐缓冲溶液各1mL,并混合均匀。稀释水的pH值应为7.2,其BODS应小于0.2mg/L。

⑩接种液可选以下任一种,以获得适用的接种液。

城市污水:一般采用生活污水,在室温下放置一昼夜,取上层清液使用。

表层土壤浸出液:取100g花园土壤或植物生长土壤,加入1L水,混合并静置10min,取上层清液使用。

其他:含城市污水的河水或湖水,污水处理厂的出水。

当分析含有难于降解物质的污水时,在排污口下游3-8m处取水样作为污水的驯化接种液。如无此种水源,可取中和或经适当稀释后的污水进行连续曝气,每天加入少量该种污水,同时加入适量表层土壤或生活污水,使能适应该种污水的微生物大量繁殖。当水中出现大量絮状物,或检查其化学耗氧量的降低值出现突变时,表明适用的微生物已进行繁殖,可用做接种液。一般驯化过程需要3-8天。

⑪接种稀释水取适量接种液,加于稀释水中,混匀。每升稀释水中接种液加入量为:生活污水为1-l0mL,表层土壤浸出液为20-30mL,河水、湖水为10-100mL。接种稀释水的pH值应为7.2,BOD5值在0.3-1.0mg/L范围内为宜。接种稀释水配制后应立即使用。

4.操作步骤

(1)采样
采取具有代表性的水样。

(2)水样的预处理

①水样的pH值若超出6.5-7.5范围时,可用盐酸或氢氧化钠稀溶液调节至7,但用量不要超过水样体积的0.5%。

②水样中含有铜、铅、锌、镉、铬、砷、氰等有毒物质时,可使用经驯化的微生物接种液的稀释水进行稀释,或增大稀释倍数,以减少有毒物的浓度。

③含有少量游离氯的水样,一般放置1-2h游离氯即可消失。对于游离氯在短时间不能消散的水样,可加入亚硫酸钠溶液,以除去之。

④从水温较低的水域中采集的水样,可能含有过饱和溶解氧,此时应将水迅速升温至20℃左右,充分振摇,以赶出过饱和的溶解氧。

从水温较高的水域或污水排放口取得的水样,则应迅速使其冷却至20℃左右,并充分振摇,使与空气中氧分压接近平衡。

(3)不经稀释的水样的测定

溶解氧含量较高、有机物含量较少的地表水,可不经稀释,而直接以虹吸法将约20℃的混匀水样转移至两个溶解氧瓶内,转移过程中应注意不使其产生气泡。以同样的操作使两个溶解氧瓶充满水样,加塞水封。

立即测定其中一瓶溶解氧。将另一瓶放入培养箱中,在(20±1)℃培养5天后,测其溶解氧。

(4)需稀释水样的测定

稀释倍数的确定:地表水可由测得的高锰酸盐指数乘以适当的系数求出稀释倍数(见表2-13)。工业污水可由重铬酸钾法测得的COD值确定。通常需作三个稀释比,即使用稀释水时,由COD值分别乘以系数0.075、0.15、0.225,即获得三个稀释倍数;使用接种稀释水时,则分别乘以0.075、0.15和0.225,获得三个稀释倍数。稀释倍数确定后按下法之一测定水样。

①一般稀释法按照选定的稀释比例,用虹吸法沿筒壁先引入部分稀释水(或接种稀释水)于1000mL量筒中,加入需要量的均匀水样,再引入稀释水(或接种稀释水)至800mL,用带胶板的玻璃棒小心上下搅匀。搅拌时勿使搅棒的胶板露出水面,防止产生气泡。

按不经稀释水样的测定步骤,进行装瓶,测定当天溶解氧和培养5天后的溶解氧含量。另取两个溶解氧瓶,用虹吸法装满稀释水(或接种稀释水)作为空白,分别测定5天前、后的溶解氧含量。

②直接稀释法直接稀释法是在溶解氧瓶内直接稀释。在已知两个容积相同(其差小于1mL)的溶解氧瓶内,用虹吸法加入部分稀释水(或接种稀释水),再加入根据瓶容积和稀释比例计算出的水样量,然后引入稀释水(或接种稀释水)至刚好充满,加塞,勿留气泡于瓶内。其余操作与上述稀释法相同。在BOD5测定中,一般采用叠氮化钠改良法测定溶解氧。如遇干扰物质,应根据具体情况采用其他测定法。

(三)数据处理

1.不经稀释直接培养的水样

BOD5(mg/L)=c1一c2

式中c1——水样在培养前的溶解氧浓度,mg/L;c2——水样经5天培养后剩余溶解氧浓度,mg/1L。

2.经稀释后培养的水样

BOD5(mg/L)=(c1一c2)一(b1一b2)fl/f2

式中b1——稀释水(或接种稀释水)在培养前的溶解氧浓度,mg/L;b2——稀释水(或接种稀释水)在培养后的溶解氧浓度,mg/L;f1——稀释水(或接种稀释水)在培养液中所占比例;f2——水样在培养液中所占比例。

(四)注意事项

1.测定一般水样的BOD5时,硝化作用很不明显或根本不发生。但对于生物处理池出水,则含有大量硝化细菌。因此,在测定BOD5时也包括了部分含氮化合物的需氧量。对于这种水样,如只需测定有机物的需氧量,应加入硝化抑制剂,如丙烯基硫脲(ATU,C4H8N2S)等。

2.在两个或三个稀释比的样品中,凡消耗溶解氧大于2mg/L和剩余溶解氧大于lmg/L都有效,计算结果时,应取平均值。

3.为检查稀释水和接种液的质量以及化验入员的操作技术,可将20mL葡萄糖一谷氨酸标准溶液用接种稀释水稀释至1000mL,测其BOD5,其结果应在180-230mg/L之间。否则,应检查接种液、稀释水或操作技术是否存在问题。

4.玻璃器皿应彻底洗净,先用洗涤剂浸泡清洗,然后用稀盐酸浸泡,最后依次用自来水、蒸馏水洗净。

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