贴壁细胞的传代，需实验消化酶等使细胞从其生长的表面离开，也可加阳离子（Ca2+,Mg2+)鳌合剂EDTA协助。常用0.25%(W/V)胰蛋白酶加0.03%(W/V)EDTA作为消化液。

传代时先用消化液浸洗一次，175的培养瓶需加5-l0ml，然后吸弃。再加少量消化液，如T75的培养瓶中加2-5ml，显微镜下观察，至细胞变圆，脱离瓶底壁，多数细胞需5-15分钟。为避免细胞聚成团块，注意不要强烈吹打，不要摇晃或敲打培养瓶。耐心等待细胞自行脱离。有的贴壁细胞很难脱壁，可置37℃培养箱中加速。细胞脱壁后，直接向培养瓶中加入含血清的培养液，通常不必离心，血清可抑制胰蛋白酶的活性。当然，若用无血清或低血清的培养液时，离心这一步就不能省了。125g离心5分钟，移除上清液，加培养液，用吸管轻轻吹打，分散细胞，分到新培养瓶中。分瓶的比例通常在1:2一1:20之间，或者根据具体的细胞以更高的比例分瓶。具体到所培养的细胞，可咨询细胞提供者。