染色剂，尤其是碱性染色剂在低浓度下，可抑制细菌生长。其中比较重要的有三苯甲烷染料（孔雀绿、亮绿、结晶紫等）和吖啶衍生物（吖啶黄和原黄素）。一般革兰氏阳性菌比革兰氏阴性菌对染色剂更敏感。

把结晶紫、亮绿、孔雀绿等染料加人到培养基中使其最终浓度达到10万一50万倍等不同稀释度，观察对不同细菌的抑制效果。