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血清学的沉淀反应

发布时间:2016-04-13 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:1260

可溶性抗原与相应抗体结合,在有适量电解质存在下.经过一定时间,形成肉眼可见的沉淀物,称为沉淀反应(precipitation)。反应中的抗原称为沉淀原.抗体为沉淀素。由于在单位体积内抗原量大,为了不使抗原过剩,故应稀释抗原.并以抗原的稀释度作为沉淀反应的效价。主要包括液相沉淀反应和固相沉淀反应两大类。液相沉淀反应包括环状沉淀反应、絮状沉淀反应、免疫浊度测定,固相沉淀反应包括免疫电泳和免疫琼脂扩散沉淀反应。

(1)液相沉淀反应液相沉淀反应指抗原抗体在以生理盐水或其他无机盐缓冲液为反应介质的液相内自由接触,短时间可出现反应。

①环状沉淀反应:环状沉淀反应是一种定性试验方法,可用已知抗体检测未知抗原。将已知抗体注入特制小试管中,然后沿管壁徐徐加人等量抗原,如抗原与抗体对应,则在两液界面出现白色的沉淀圆环。

②絮状沉淀反应:絮状沉淀反应是将已知抗原与抗体在试管(如凹玻片)内混匀,如抗原抗体对应,而又二者比例适当时.会出现肉眼可见的絮状沉淀,此为阳性反应。

③免疫浊度测定:免疫浊度测定是指可溶性抗原与相应抗体特异结合后形成抗原抗体复合物,使反应液出现浊度。通过测定反应液的浊度确定抗原相对含量。

(2)固相沉淀反应抗原抗体分子可以自由扩散的固体状琼脂凝胶中进行,抗原抗体在比例合适处结合,形成较稳定的白色沉淀线,即为固相沉淀反应。

①免疫电泳:一种区带电泳与免疫双扩散相结合的免疫化学分析技术,可用于分析样品中抗原的性质。先在琼脂凝胶内利用电泳技术把标本中的蛋白质组分电泳成不同的区带,然后在与电泳方向平行处挖一小槽,加人已知的抗体与已分成区带的蛋白抗原成分做双向琼脂扩散,在各区带相应位置形成沉淀弧。根据所产生的沉淀弧线的数量、形态和位置来分析标本所含抗原成分的性质和相对含量。

②免疫琼脂扩散试验:利用可溶性抗原抗体在半固体琼脂内扩散,若抗原抗体对应,且二者比例合适,在其扩散的某一部分就会出现白色的沉淀线。每对抗原抗体可形成一条沉淀线。有几对抗原抗体,就可分别形成几条沉淀线。琼脂扩散可分为单向扩散和双向扩散两种类型。单向扩散是一种定量试验。可用于免疫蛋白含量的测定。而双向扩散多用于定性试验。由于方法简便易行.常用于测定分析和鉴定复杂的抗原成分。

a.单向免疫扩散试验:可溶性抗原在含有相应抗体的凝胶中扩散.形成浓度梯度,在抗原与抗体浓度比例恰当的位置形成肉眼可见的沉淀环。本法可用于抗原定量分析。

b.双向免疫扩散试验:将抗原和抗体分别加到凝胶板上的小孔中.各自向四周扩散并相遇,在最恰当的比例处形成抗原抗体沉淀线。本法可用于抗原或抗体的定性、半定量及组分分析。

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