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奶及奶制品中三聚氰胺含量的测定

发布时间:2016-08-12 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:1160

一、实验原理

三聚氰胺(Melamine)俗称密胺或蛋白精,化学式为C3H6N6,按照IUPAC命名为“1,3,5-三嗪-2,4,6-三氨基”,是一种三嗪类含氮杂环有机化合物。三聚氰胺外观为白色晶体,几乎无味,微溶于水(3.1 g·L-1常温),可溶于甲醇甲醛乙酸、热乙二醇、甘油吡啶等溶剂。三聚氰胺对人畜健康有害,不可用于食品加工或食品添加物,常用于化工生产的原料。由于三聚氰胺分子中含有大量氮元素,一些不法厂商利用传统测定方法(克氏定氮法)的漏洞,通过添加三聚氰胺,提高奶制品、饲料等产品中蛋白质含量,以谋取超额利润。

高效液相色谱是色谱法的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析。

高效液相色谱测定三聚氰胺,是将三聚氰胺从样品中分离进而检测,克服了克氏定氮法以氮折算成蛋白质含量的缺陷。本法具有操作方便、不需要衍生化、简便易行的优点。采用外标法进行定量分析,检测范围广泛,方法稳定可靠。

二、主要仪器和药品

高效液相色谱仪(CAPCELL PAK CR液相色谱柱,紫外检测器243 nm),混合性阳离子交换固相萃取柱(60 mg,3 ml),滤膜(0.45 um,有机相)。

甲醇乙腈(色谱纯)、氨水(质量分数25%一28%,分析纯)、三氯乙酸溶液(称取10g三氯乙酸加水至1000 ml,配制成10 g·L-1溶液)、氨水甲醇溶液(量取5 ml氨水,溶解于100 ml甲醇中)、乙酸铅溶液(取22 g乙酸铅用约300 ml水溶解后定容至1L,配制成22 g·L-1溶液)、甲醇溶液(200 ml甲醇加入800 ml水中混匀)、三聚氰胺标准品(纯度>99%)、三聚氰胺标准储备液(称取100 mg,精确到0.1 mg)的三聚氰胺标准品,用甲醇溶液溶解并定容于100 ml容量瓶中)、三聚氰胺标准液(吸取标准储备液 5.00 ml,于50 ml容量瓶内,用甲醇溶液定容至50 ml,该溶液三聚氰胺浓度为100 ug·ml-1。用移液管分别移取标准液1、5、10、25、50 ml于5个100 ml容量瓶内,用甲醇溶液定容备用)。

三、实验步骤

1.提取

奶粉样品取样5g、液态奶制品20 g(精确至0.0001g),准确加入50 ml三氯乙酸溶液,准确加入5 ml乙酸铅溶液分离蛋白质。摇匀试液,超声震荡20 min。静置2 min,取上层提取液约30 ml转移至离心管,在10000 r·min-1离心机上离心5 min。

2.净化

分别用3 ml甲醇,3 ml水活化混合型阳离子交换固相萃取柱,准确移取10 ml离心液分次上柱,控制过柱速度在1 ml·min-1以内。再用3 ml水和3 ml甲醇洗涤混合型阳离子交换固相萃取柱,抽近干后用氨水甲醇溶液3 ml洗脱。洗脱液50℃氮气吹干,准确加入甲醇溶液,漩涡振荡1 min,过0.45 um滤膜,上机测定。

3.测定

色谱柱:CAPCELL PAK CR液相色谱柱4.6 mmlD x 150 mm;

流动相:10 mmol·L-1醋酸胺水溶液:乙腈(pH=3)=50:50;

流动相流速:1.5 ml·min-1

柱温:室温;

检测波长:243 nm.

将标准溶液和试液分别在相同条件下进样测定两次,并记录其峰面积。

4.数据处理

①以标准溶液浓度对峰面积绘出标准曲线。

②从标准曲线上查处试液对应的浓度,并换算成原始样品的含量。

四、注意事项

离心液通过混合型阳离子交换固相萃取柱时,流速不能太快,应控制过柱速度在1 ml·min-1以内。

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