多环芳烃的分析方法主要有高效液相色谱法、气相色谱法、气相色谱／质谱联用法、液相色谱／质谱联用法等，其中高效液相色谱法和气相色谱／质谱联用法是两种应用比较广泛的方法，也是标准分析方法。目前国内外关于多环芳烃的分析己存在许多标准方法（见表5.3)。我国HJ 478～2009中规定用高效液相色谱法分析16种多环芳烃，GB/T 5750-2001和GB/T 5750.8-2006规定使用纸层析一荧光分光光度法和高效液相色谱法，美国EPAMethod 610规定了气相色谱／质谱联用法和液相色谱法分析16种多环芳烃，Method 550.1中使用液相色谱法分析16种多环芳烃，Method 8270D规定了气相色谱／质谱联用法分析16种多环芳烃。

一、液相色谱法

液相色谱法是比较经典的多环芳烃分析方法，其原理是多环芳烃通过C₁₈色谱柱分离，在紫外检测器或者荧光检测器上进行检测。16种优先控制多环芳烃理化性质差异较大，以甲醇／水或者乙腈／水为流动相，采用梯度洗脱方式，可使其在C₁₈色谱柱上得到分离。由于危烯不产生荧光，只能采用紫外检测器分析，剩下15种多环芳烃均可产生很强的荧光信号，可采用荧光检测器，因此需要将两种检测器串联分析。

参考液相色谱条件如下：安捷伦ZORBAX Eclipse PAH色谱柱（4.6 m×250 mm, 5 um),流速1.5 ml/min，流动相为乙腈和水。梯度洗脱条件：0～5 min：乙腈浓度保持50%, 5～25 min：从50％增加至95%, 25～42 min：保持95%, 42～52 min：恢复至初始浓度50%。柱温25℃，进样量20ul。紫外检测器的波长为220 nn，荧光检测器的激发和发射波长见表5.4。16种多环芳烃在45 min内得到基线分离，如图 5.1所示。

注：(A: HPLC, B: UPLC)，紫外吸收220 nm，序号对应多环芳烃如表5.1所示。

图5.116种PAHs (0.4 ug/ml）的色谱分离图

近十年来，随着超高压液相色谱仪的商品化，其在环境监测领域应用越来越广泛。由于超高压液相色谱采用2 gm左右粒径填料的色谱柱，最高耐压可达100 MPa左右，因而可得到比常规液相色谱更高的柱效和更快的分离速度。采用超高压液相色谱仪分析是多环芳烃监测的一个重要发展方向。

参考超高压液相色谱（UPLC）条件如下：Waters BEH Shield RP18色谱柱(2.1 mm×150mm, 1.7 um)，柱温45℃，流速0.5 ml/min，流动相：A水、B乙腈，梯度洗脱（0～2 min: 50%B, 2～15 min: 50％增加至80% B, 15～20 min: 50% B)，进样量5
ul。紫外检测器的波长为220 nm,荧光检测器的激发和发射波长见表5.4。 16种多环芳烃在18 min内得到基线分离，如图5.1所示。

有研究报道进样分析中二氯甲烷的含量影响PAHs荧光信号的响应。当二氯甲烷含量为10％时，15种PAHs的荧光信号几乎没有变化，当二氯甲烷的含量是30％和50％时，15种PAHs的荧光信号均有不同程度的变化，其中苯并[a]芘和苯并[g,h,i]}苝的荧光信号改变明显，增强了约90％和40%。溶剂环境（如溶剂极性、黏度和弛豫度等）影响荧光物质的信号，其中溶剂极性的增加，可引起荧光强度的下降或者荧光波长的红移。随着溶剂中二氯甲烷的含量增加，溶剂极性减小，使得苯并[a]芘和苯并[g,h,i]苝的荧光信号显著提高。因此需将二氯甲烷溶剂充分置换为乙腈，避免由于荧光信号的不稳定而降低PAHs检测的准确性。

液相色谱分析多环芳烃时，需要注意的几个问题：

(1)进入液相色谱分析的样品，其溶剂需要从二氯甲烷（或正己烷）完全置换到乙腈（或甲醇），否则会导致进样体积不准，引起较大定量误差，另外溶剂中的二氯甲烷会影响多环芳烃的荧光信号强度。

(2）排除仪器进样残留引起的本底干扰。由于多环芳烃具有较强的疏水性，容易残留在进样系统的塑料材质（如聚四氟乙烯）管路中。因此建议使用高浓度的乙腈或甲醇作为进样前后洗针用溶剂，减少进样残留，并且每次分析完高浓度样品后，需要进行空白进样，查看可能的进样残留后，再分析低浓度样品。

(3)进行液相色谱分析前，样品需要进行0.45 um过滤操作，以避免颗粒物进入色谱柱，影响色谱柱寿命。对于超高压液相色谱，样品务必通过0.22 um滤膜过滤。在过滤过程，尽量避免使用塑料材质物品；如无法避免，则在使用之前有机溶剂冲洗数次，降低背景干扰。

(4）由于应用荧光检测器检测多环芳烃时，需要根据不同多环芳烃的出峰时间，切换检测器的激发波长和发射波长。多环芳烃保留时间的改变，直接影响荧光检测的准确性。因此每次分析需保证色谱柱经过足够的平衡，然后进标准样品分析，确定荧光激发发射的时间程序。分析样品时，需保证周围环境条件的稳定，避免多环芳烃的保留时间偏移。当样品较多时，则分析中需多次检查多环芳烃的保留时间是否偏移。