北京普天同创生物科技有限公司

  • CNAS实验室认可证书
  • 标准物质定级证书
  • 豫南检测资质认定证书
  • 质量管理体系认证证书
  • 农产品资质证书
  • 伟业计量高企认证证书
  • 中国计量测试学会合作单位
新闻
  • 产品
  • 仪器
  • 新闻
  • 帖子
  • 课堂

在线客服

细胞培养实验室的建立

发布时间:2017-03-09 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:945

一、实验室的基本布局和设施

细胞培养实验的清洁级别要求较高,尤其无菌室是完成细胞制备和培养等工作的房间。一般是在房间内装修一个制式的封闭间,最好带有空气净化装置。准备室和消毒室的要求与普通实验室一样。

(一)细胞培养室

1.无菌室无菌室是为进行无菌操作而设计的封闭空间,应设在房间的背阴处,远离窗户,墙壁光滑无死角,便于清洁与消毒,面积约50~70m2。一般分为操作间和缓冲间两部分,操作间又可分为细胞室和感染室。在细胞室里制备或复苏细胞,或进行传代培养等。室内需放置净化工作台、实验边台、倒置显微镜和小型台式离心机(收集细胞)等;在感染室里用细胞进行分离或感染病毒、衣原体和立克次体等,感染实验室里最好有生物安全柜,尤其在进行未知病毒等分离培养和鉴定时要求在生物安全柜内进行,没条件者也可放置净化工作台。此外,根据需要可放置边台、水浴箱、台式低温超速离心机、冰箱(贮放病毒种和病毒液,培养基和试剂)等(图1-1)。无菌室最好安装空气净化系统,可过滤进入封闭间的空气,与周围实验室比较应保持正压。无菌室常备紫外线消毒灯,其他的室内陈设应尽量减少。

实验人员进入无菌室,中间需通过缓冲间,缓冲间是设在无菌室和普通实验室中间的一个屏蔽。缓冲间可放置co2培养箱、co2缸瓶,液氮罐和消毒杀菌机、器具柜(贮放无菌器皿和无菌衣物)等。设备较好的实验室,尤其是临床细胞实验室,担负生产干细胞等细胞工程产品或生产疫苗及细胞因子等产品的实验室,实验人员应先经过一个气流室,吹掉皮肤表面和外衣上的浮尘后进入缓冲间,仔细洗手后再换无菌衣帽,戴口罩后才能进入无菌间。使用无菌室时应按以下顺序:①进入实验室前先打开室内的紫外线灯20分钟,关闭紫外线灯10分钟后再进入无菌间内;②熟悉实验内容和步骤,备齐必要的材料和器具,尽量一次性带入无菌室,杜绝在实验过程中反复出入无菌室取送物品;③在缓冲间先仔细洗手,然后要穿戴无菌衣帽和口罩;④进入无菌间内用消毒液消毒双手后再进行实验操作,所有操作应遵守无菌原则;⑤完成实验后先将培养物放置CO2培养箱,再用消毒液擦净实验台面和地面,将用过物品、废包装纸等垃圾移出室外,送消毒室处理,退出后打开紫外线灯消毒30分钟。

2.超净工作台超净工作台是细胞培养室的无菌操作装置,工作原理是驱动由供气滤板经高效滤菌净化后的空气,形成特定的超净工作空间,可达100级的局部洁净工作区域,并通过工作台面形成气流屏障,阻止外界污染物的侵入,使操作过程中产生的飞沫限制在超净工作台中,由于高洁净度和移动灵活等优点被广泛用于细胞培养室。超净工作台的结构比较密闭,以气流方向可将超净工作台分为垂直式、侧流式和外流式三种类型,外界空气通过滤器从上面、侧面或正面流入操作箱内,并能形成气流屏障保持台面无菌。因为操作过程中可能产生有毒的物质,所以采用垂直气流比水平气流安全。超净台所占空间小,操作方便,应安装在隔离好的无菌间内或清洁无尘的房间内。工作时先接通电源,紫外线灯照射20分钟后关掉,超净台启动10分钟后打开前面玻璃操作窗,消毒手部后即可进行无菌操作。工作结束时清理实验台面,关闭操作窗,切断空气滤器电源,打开紫外线灯进行消毒。超净台应为一般实验室必备的设施,尤其用培养细胞进行连续形态学和生物化学实验时更为方便,效果如同在无菌室内。

超净工作台需要合理的布置及经常性的维护,当进行移液,倾倒液体的操作过程会产生飞沫并沉积在超净工作台内物体的表面,超净工作台不合理的放置及不规范的使用,会影响和破坏超净工作台的气流方向,导致飞沫更广泛地沉积。飞沫沉积是导致超净工作台内物品污染的主要因素,可致潜在污染的进一步传播。为减少交叉污染的发生,应尽可能减少超净工作台内的物品摆放。当使用新款超净台时可经常注意工作区上方微压表的指示数据,当指针从绿色区转入红色警示区时,说明高效空气过滤的容尘量趋于饱和,一旦感到气流变弱,即便加大电机电压也不见情况好转,说明滤器已被阻塞,应及时更换。一般高效过滤器为3年更换1次,粗过滤器中的过滤布也应定期(3~6个月)更换1次。超净工作台使用前后要例行清洁和进行定期的熏蒸处理,新购买的和久置未用的超净工作台,除用紫外线灯等照射外最好能进行熏蒸处理,然后在机器处于工作状态时,在操作区的四角及中心位置各放一个打开的营养琼脂平板,2小时后盖上盖,并置37℃培养箱中培养24小时,计算菌落数。平均每个平皿菌落数必须少于0.5个,才能正常使用。超净用的滤板和紫外杀菌灯都有标定的使用年限,应按期更换。

3.生物安全柜(biological safety cabinets, BSCs)在细胞培养实验室的日常工作中会遇到利用细胞分离病毒或进行抗病毒药物筛选的实验等,一般遇到的微生物和生物活性因子属于I级,也有可能会遇到Ⅱ级以上。根据所接触的生物病原体的危害程度,生物安全的防护水平(biosafety level, BSL)应属于BSL-1~2级实验室,操作原代培养物和病毒等微生物毒株,以及诊断性标本等具有感染性的实验材料时,为保护操作者、实验室环境以及实验材料,使其避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物,实验操作应在生物安全柜内进行(图1-2)。当操作液体或半流体,例如摇动、倾注、搅拌,或将液体滴加到固体表面上或另一种液体中时,这些实验室操作都可能产生感染性气溶胶。由于肉眼无法看到直径小于5um的气溶胶以及直径为5~100um的微小液滴,因此实验室工作人员通常意识不到有这样大小的颗粒在生成,并可能吸入或交叉污染工作台面的其他材料。正确使用生物安全柜可以有效减少由于气溶胶暴露所造成的实验室感染以及培养物交叉污染。生物安全柜同时也能保护环境。生物安全柜应放置在远离人员活动、物品流动以及可能会扰乱气流的地方,在安全柜的后方以及每一个侧面要尽可能留有30cm的空间,以利于对安全柜的维护。

(二)常规操作室(准备室)

常规操作室应放置净化工作台、普通实验台、边台(书写实验记录)、储物柜和化学药品柜(放置药品和消毒过的物品)等;分析检测用设备如倒置显微镜、相差显微镜等,各种检测仪器(如酶标仪、PCR仪、紫外分光光度仪等),普通培养箱等;配液用设备如药品试剂、称量药品用普通天平和精密天平(扭力天平和电子天平),pH计(测量培养用液pH),比重计和各种容器等;其他实验设施如磁力搅拌器(配制溶液室搅拌溶液)、水浴锅、定时钟、不同类型的离心机(普通、高速低温、台式超速低温等),蒸馏水蒸馏器、电冰箱、低温冰箱、液氮罐等。

(三)洗刷与消毒灭菌室(或消毒灭菌区)

洗刷与消毒灭菌室(或区)的功用有二,一是要消毒和处理实验中使用的器具,尤其是被污染的用具,实验中被污染的物品,先要灭菌后才能丢弃或重新处理再使用;二是要洗刷新购进的和用过并需循环使用的器材等。消毒室内必备有几个自来水管和充足空间的水池、酸缸、吸管自动冲洗器、玻璃器皿清洗箱、干烤箱、紫外线灯、消毒蒸锅和高压灭菌器等;准备器材需用储物柜(存放杂物)、垃圾桶等。尽管目前有许多实验室选用一次性无菌用品,但用过的物品仍需灭菌后才能丢弃,而且我们提倡资源的循环利用,尤其是玻璃器皿的洗刷与消毒灭菌处理等要作为实验室的一项重要工作。

评论

登录后才可以评论

立即登录
分享到微信
关闭
普天同创
请告知您的电话号码,我们将立即回电

通话对您免费,请放心接听

温馨提示:

1.手机直接输入,座机前请加区号 如18601949136,010-58103629

2.我们将根据您提供的电话号码,立即回电,请注意接听

3.因为您是被叫方,通话对您免费,请放心接听