试验可用鱼类、藻类等，其中，鱼类、蚤类毒性试验应用较多。

    1．鱼类急性毒性试验

    鱼类毒性试验可以找出污染物半数致死浓度与安全浓度，为制定水质标准和废水排放标准提供科学依据。这是检测成分复杂的工业废水和固体废物渗滤液的有效方法。

    试验要选用对毒性较敏感的鱼种，同时要对其进行驯养。试验用鱼大小相近(体长约3 cm，体重约2 g)，选择出的鱼必须在与试验条件相似的生活环境下驯养l0 d左右，试验前一天停止喂食。试验溶液用未污染的河水或湖水配制，pH为6．7～8．5，水深大于16 cm。溶液温度和DO保证适宜，对冷水鱼为12～28℃，DO>5 mg／L；对温水鱼为20～28℃，DO>4 mg／L。正式试验前，先进行探索性试验，以确定试验溶液的浓度范围。试验溶液通常选7个浓度(至少5个)，浓度间隔取等对数间距，如10．0、5．6、3．2、1．8、1.0，可用体积分数或质量浓度(mg／L)表示。另设对照组，对照组在试验期间鱼死亡超过10％，则这个试验结果不能采用。

    试验开始前8 h应连续观察和记录试验情况，之后继续观察并记录第24 h、48 h和96 h鱼的中毒症状和死亡情况，判断毒物或工业废水的毒性。正式试验最少进行48 h，最好96 h。96 h内鱼类没有表现出中毒症状时，可延长时间进行安全浓度验证试验。在鱼类、水生植物毒性试验中常采用半数忍受限度(TL_m)评价毒性大小，它是根据试验龟存活半数以上和半数以下的数据与相应试验毒物浓度绘于半对数坐标纸上，用内插法求得24 h和48 h的LC₅₀值后，计算出安全浓度。计算安全浓度的经验式有多种，下面是常用的三种：

               24LC₅₀×0.3

安全浓度=━━━━━━━━━━

           (24LC₅₀／48LC₅₀)³

                48LC₅₀×0.3

安全浓度=━━━━━━━━━━

            (24LC₅₀／48LC₅₀)²

安全浓度=96LC₅₀×(0.1-0.01)

    按公式计算出鱼的生存安全浓度后，耍进一步做验证试验，特别是具有挥发性和不稳定性毒物或废水，应当用恒流装置进行长时间的试验验证，并设对照组进行比较，如发现有中毒症状，应降低毒物或废水的浓度再试验。

    2．枝角类急性毒性试验

    枝角类(Clandocera)通称蚤类，俗称红虫或鱼虫，广泛分布于自然水体中，是鱼类的天然饵料。其繁殖力强，生活周期短，易培养，且对许多毒物敏感。当含有农药等有毒废水排入水体时，往往先引起蚤类的死亡，因此在制定渔业水体水质标准和工业废水排放标准时，常配合鱼类毒性试验被广泛采用。

    我国有蚤类130多种，试验常用的有大型蚤、蚤状蚤、隆线蚤和多刺裸腹蚤等。一种蚤在整个生活史中会出现三种个体，即雄蚤、孤雌生殖雌蚤和有性生殖蚤，它们对毒物的敏感性不同，试验时应该用纯一个体。孤雌生殖雌蚤数量多，试验均采用这种个体。用风干马粪l70 g，菜园土2 000 g，加过滤池水l0L，在室温15～18℃下经3～4 d，用细筛过筛，再用过滤水稀释2～4倍，便可用于试验蚤的培养和驯养。这种培养液为Banta液，效果很好，至今仍被采用。培养最好在恒温设备下进行，并可适当曝气。试验用水必须清洁，水中悬浮物应当滤除。水一般要经活性炭过滤，必要时用紫外线消毒。用自来水时必须人工曝气或静置1～2 d。水温20℃左右，pH为8～9，DO>4 mg／L。

    枝角类急性毒性试验分为预备试验和正式试验两部分。预备试验的浓度范围可广些，每个浓度2～3个蚤。根据急性中毒试验要求的时间(24 h或48 h)

找出大部分不死亡的浓度；正式试验选择浓度的方法与鱼类试验相同。急性试验时，用80 mL小烧杯装50 mL试验水，每杯放10个蚤。死亡标准掌握的尺度

直接关系到所求的数值，一般用停止活动(沉到水底不动)作为死亡的标准。枝角类急性试验一般为48 h，也有用24 h或96 h的，急性试验一般不喂食。

    3．发光细菌毒性试验

    鱼类毒性试验的缺点是试验周期长，方法繁琐。而发光细菌法快速、简便，只需1 h。自从20世纪80年代美国Beckman公司推出功能完备的生物发光光度计Microtox后，这一急性毒性测试技术迅速推广，因此人们也将其称为Mic-rotox技术。发光细菌是一类非致病的革兰氏阴性兼性厌氧微生物，在适当条件下能发射一定强度可见的蓝绿色光。与毒物接触后，其发光强度有所改变，变化幅度的大小与受试物的浓度呈相关关系，同时与该物质的毒性大小有关。毒物的毒性可以用EC₅₀表示，即发光细菌发光强度降低50％时毒物的浓度。我国学者建议根据发光细菌毒性试验的结果将测定物质毒性分级。

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