血管内皮细胞（vascular endothelial cell)是衬于心血管和毛细血管的腔面的一层扁平上皮细胞，呈多边形，边缘成锯齿状，相互嵌合而延续。血管内皮细胞的培养因取材、消化等方法不同，可分为灌注消化法、消化刮取法、组织块消化法等。灌注消化法是分离血管内皮细胞的常用方法，适用多种动物较大血管的血管内皮细胞的分离培养，能够获得较纯的内皮细胞。原代培养的细胞贴壁生长后可进行传代培养，传代培养可供各种实验研究应用。

【材料】

1．组织来源兔的颈总动脉或股动脉。

2．培养液培养用液为M199或DMEM，加20％胎牛血清、2mmol/L谷氨酰胺、1 mmol/L丙酮酸钠、3.5g/L葡萄糖（pH 7.2)。

3．其他用液 25万U/L胶原酶，无钙镁的CMF-Hanks或CMF-PBS液，100IU/ml青霉素、l00 ug/ml链霉素。

4．器具手术用刀、剪、镊、止血钳等，眼科剪和眼科镊静脉留置插管、注射器、无菌培养皿。

【方法】

1．取材按动物体重注射25mg/kg戊巴比妥钠麻醉动物，颈动脉放血将动物处死。剪（剃）除颈部或腹股沟区的毛，用75％乙醇消毒手术区，手术取颈总动脉或股动脉，长约10～15cm，放入预冷的CMF-Hanks液平皿中，带入超净工作台内。

2．血管处理用CMF-Hanks液洗净血管，并在解剖显微镜下用眼科剪，镊将血管的外膜结缔组织剥除，并洗净血管腔内的血液。

3．消化组织细胞将血管放入培养皿中，用CMF-Hanks液冲洗3次。从动脉一端插入静脉留置导管并结托固定，然后用丝线结扎血管的另一端。通过静脉留置导管向血管内注入胶原酶，其量以血管充盈为准。在37℃孵箱内消化10～15分钟。

4．制备细胞在血管的游离端切口，收集消化液，然后用l0ml培养液冲洗管腔。将消化液和冲洗液以1500r/min离心10分钟，吸弃上清液，用含20% FBS的DMEM培养液混悬沉淀细胞。将细胞接种在培养皿内，置37℃,5% C0₂孵箱中培养，每隔2～3天换液1次，换液时吸去原培养皿内1/2～2/3的培养液，用新鲜培养液补齐原量继续培养。待细胞生长贴壁形成单层时进行传代。

【结果】

消化下来的细胞接种培养皿，30分钟后开始贴壁，细胞多呈圆形，少数可为多边形。12小时后可见细胞生长增殖现象，堆积生长呈小簇状。经24小时细胞可形成细胞群，1周后各细胞向外扩展相互融合形成单层细胞，为典型扁平长多角形细胞，呈卵石状排列。