内皮祖细胞（endothelial progenitor cell, EPC）是一种能直接分化为血管内皮细胞的前体细胞，参与人胚胎血管生成，以及出生后的血管新生过程。EPC在缺血性疾病、创伤愈合中的具有重要治疗作用和广阔的临床应用前景。

【材料】

1．组织来源产后胎儿的新鲜脐带。

2．培养用试剂

（1）清洗液：PBSa

(2）消化液：PBS配制的0.1％胶原酶。

3．培养液RPMl 1640 。

4．实验器材手术刀、解剖剪、解剖镊、眼科剪和眼科镊。

【方法】

1．取材无菌剪取10～15cm长一段产后新鲜脐带，立即送实验室制备细胞。如不能立即培养，可于12小时内保存于4℃冰箱内。用三通注射器吸取温PBS液注入脐静脉中洗去残血，在入口处用线绳扎紧，以防液体反流。

2．消化用血管钳夹紧脐带的一端，从另一端向脐静脉中徐徐注入终浓度为0.1％的粗制胶原酶，充满血管，消化3～10分钟；注入口用线绳扎，以防液体反流。

3．分离细胞吸出含有内皮细胞的消化液，注入离心管中，注入温PBS轻轻反复冲洗，可以多次重复。

4．接种与培养离心去上清液，加入RPMl 1640培养液制成细胞悬液，接种入培养器皿中，置温箱培养。2～3天后可见细胞长成单层。

【结果】

内皮祖细胞培养至第6天后，细胞总数较少。贴壁细胞按形态可分为3类：梭形内皮样细胞、圆形且体积较小的细胞、体积较大且胞内颗粒较多的细胞。

【注意事项】

1．应取尽量新鲜的脐带材料。

2．向血管腔内注入消化液时，应防止消化液溢出，以免消化到血管外膜，引起污染。