骨髓间充质干细胞诱导分化为脂肪细胞
来源/作者:中国标准物质网  日期:2017-03-09

大剂量激素可以诱导MSCs中基因表达发生变化,导致其向脂肪细胞分化。并且随着诱导时间的延长,脂肪细胞比例不断增加。

【材料】

1.组织来源第3代对数生长期骨髓间充质干细胞。

2.培养用试剂0.25%胰酶。

3.培养基配方和制备

(1)骨髓间充质干细胞培养基:L-DMEM培养基含有10% FBS,100U/ml青霉素和100ug/ml链霉素

(2)骨髓间充质干细胞成脂肪诱导液:L-DMEM培养液含有10%胎牛血清、10ug/ml胰岛素、1um地塞米松、0.5mM 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX),100uM吲哚美辛、100U/ml青霉素和100ug/ml链霉素

【方法】

1.取材 第3代对数生长期骨髓间充质干细胞弃去培养液,PBS洗涤2次。

2.消化 用0.05%胰酶消化10分钟,加入10% FBS的DMEM培养基终止消化,1500r/min离心5分钟。

3.诱导加入L-DMEM培养基,待细胞80%融合后更换培养液。实验组加人骨髓间充质干细胞成脂肪诱导液,对照组加人骨髓间充质干细胞培养基。每3~4天换液。7天后行苏丹班染色。

【结果】

第3天,光镜下可见骨髓间充质干细胞胞质内出现脂滴沉着,细胞形态变圆,第7天,苏丹Ⅲ染色示胞核呈蓝色,脂滴呈橙红色。

【注意事项】

1.添加胰岛素地塞米松、IBMX,吲哚美辛的骨髓间充质干细胞成脂肪诱导液可成功诱导骨髓间充质干细胞向脂肪细胞方向分化。

2.骨髓间充质干细胞诱导为脂肪细胞的时间为7天。

骨髓间充质干细胞诱导分化为心肌细胞

骨髓间充质干细胞具有自我更新、分化、增殖和多向分化的潜能,在体外5-氮胞苷,可将其诱导分化为表达心肌细胞特异性蛋白的心肌样细胞。

【材料】

1.组织来源第3代对数生长期骨髓间充质干细胞。

2.培养用试剂0.25%胰酶。

3.培养基配方和制备

(1)骨髓间充质干细胞培养基:L-DMEM培养基含10% FBS,l00U/ml青霉素和100 ug/ml链霉素

(2)骨髓间充质干细胞成心肌细胞诱导液:L-DMEM培养液、10%胎牛血清、10 umol/L 5-氮胞苷、1OOU/ml青霉素和100ug/ml链霉素

【方法】

1.取材第3代对数生长期骨髓间充质干细胞弃去培养液,PBS洗涤两次。

2.消化用 0.05%胰酶消化10分钟,加入10% FBS的DMEM培养基终止消化,1500r/min离心5分钟。

3.诱导加入L-DMEM培养基,待细胞融合后更换培养液。实验组加入骨髓间充质干细胞成心肌细胞诱导液,诱导24小时,PBS冲洗,更换成含15%胎牛血清的高糖DMEM培养基,继续培养4周。对照组加入常规培养液。培养4周,进行免疫组织化学染色检测肌纤维蛋白(desmin)的表达。

【结果】

第3天,光镜下可见骨髓间充质干细胞形态变圆,7天时可分化成自发搏动的心肌细胞。诱导4周细胞可表达心肌细胞的特异性蛋白desmin。

【注意事项】

1. 5-氮胞苷具有非特异型去甲基化毒性,因此在诱导心肌细胞分化中其剂量及作用时间至关重要。

2.目前公认5-氮胞昔诱导心肌细胞定向分化的最佳浓度为1Oumol/L,作用时间为24小时。

【关键词】地塞米松 胰岛素 青霉素 链霉素 胎牛血清