北京普天同创生物科技有限公司
联合应用血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和bFGF可将骨髓间充质干细胞诱导分化为内皮细胞。
【材料】
1.组织来源第3代对数生长期骨髓间充质干细胞。
2.培养用试剂0.25%胰酶。
3.培养基配方和制备
(1)骨髓间充质干细胞培养基:L-DMEM培养基含10% FBS,l00U/ml青霉素和l00ug/ml链霉素。
(2)骨髓间充质干细胞成内皮细胞诱导液:L-DMEM培养液含有10%胎牛血清、lOng/mlbFGF,20ng/ml VEGF,l00U/ml青霉素和100ug/ml链霉素。
【方法】
1.取材第3代对数生长期骨髓间充质干细胞弃去培养液,PBS洗涤2次。
2.消化用0.25%胰酶消化10分钟,加入10% FBS的DMEM培养基终止消化,1500r/min离心5分钟。
3.诱导加入L-DMEM培养基,待细胞融合后更换培养液。实验组加诱导液,继续培养4周。对照组加常规培养液。
【结果】
细胞诱导分化后2天,细胞由原来的长梭形变短、变粗,变成多角形,细胞聚集形成放射状集落;继而细胞伸出伪足相互连接,呈管网状排列,并形成管腔样结构;诱导后14~21天,血管腔样结构密度增加。管腔直径变得宽大,管腔样结构周围排列有内皮样细胞,呈铺路石样。
【注意事项】
1. VEGF可诱导MSCs形成在形态结构上与血管内皮细胞类似的内皮细胞。
2.骨髓间充质干细胞诱导分化为内皮细胞的时间为21天左右。
骨髓间充质干细胞诱导分化为神经细胞
在无血清的DMEM/F12中加入10mg/L丹参酮ⅡA诱导剂,可诱导间充质干细胞分化为神经样细胞。
【材料】
1.组织来源第3代对数生长期骨髓间充质干细胞。
2.培养用试剂0.25%胰酶。
3.培养基配方和制备
(1)骨髓间充质干细胞培养基:L-DMEM培养基含10% FBS,l00U/ml青霉素和100 ug/ml链霉素。
(2)骨髓间充质干细胞成神经样细胞诱导液:L-DMEM培养液含有10mg/L丹参酮ⅡA,100U/ml青霉素和l00 ug/ml链霉素。
【方法】
1.取材第3代对数生长期骨髓间充质干细胞,弃去培养液,PBS洗涤两次。
2.消化用0.25%胰酶消化10分钟,加入10% FBS的 DMEM培养基终止消化,1500r/min离心5分钟。
3.诱导L-DMEM培养基,待细胞80%融合后更换培养液。实验组先用含有bFGF(lOug/L)的20% FBS的L-DMEM预诱导24小时,更换培养液,PBS洗涤3次,加入骨髓间充质干细胞成神经诱导液诱导1~5小时,对照组加入骨髓间充质干细胞培养基。每3~4天换液。
【结果】
骨髓间充质干细胞大部分呈长梭形,神经细胞定向分化诱导后,细胞体积增大,呈多边形。
【注意事项】
应用10mg/L丹参酮Ⅱ A可成功诱导MSCs形成在形态结构上与神经细胞相似的细胞。
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