（一）LNcaP细胞株的培养

LNcaP是研究前列腺癌最常用的一株细胞系。LNcaP细胞系是上皮来源的前列腺癌细胞系，细胞系中雄激素受体（androgen receptor, AR）表达呈阳性，对DHT刺激反应敏感，前列腺特异性抗原（PSA）表达阳性。在体外培养时，为贴壁性细胞，但与其他各类前列腺癌细胞相比培养难度高，表现为细胞贴壁性差，细胞易脱落聚集成团，细胞间彼此连接较紧密。因此，LNcaP细胞系在传代时要注意消化过程中的操作。

【材料】

1．含10％胎牛血清的RPMI 1640,PBS缓冲液、胰蛋白酶。

2．玻璃吸管、离心管、培养瓶、移液器。

【方法】

1．镜下观察细胞在培养瓶中生长到90％左右，但仍为单层时，可进行传代。

2．将培养瓶中的原培养液弃掉，向培养瓶中加入约1 ml的PBS缓冲液，洗涤细胞，弃洗涤液。重复洗涤操作1次。

3．加入l ml胰蛋白酶（以25 mm²培养瓶为例），放入培养箱中孵育约6分钟后，倒置显微镜下观察到细胞变圆，彼此之间的间隙开始增大时，用玻璃吸管轻轻吹打细胞。肉眼观察细胞无贴壁时，继续静置约1～2分钟。

4．镜下观察细胞基本呈单细胞状态时，向培养瓶中加入1 ml含血清培养液终止消化。

5．将细胞悬液移入离心管中，1000r/min离心5分钟。

6．离心完毕后，弃掉上清液，仅保留管底的细胞沉淀。

7．向细胞沉淀中加入2ml培养液，重悬细胞。

8．向装有约4 ml培养液的新培养瓶中加入细胞悬液1 ml，晃动培养瓶混匀细胞，使细胞均匀铺满瓶底。

9．放入培养箱继续培养，每次传代后48小时内不要再晃动或再做其他处理，以免影响细胞贴壁。

（二）CWR22RV1细胞株的培养

CWR22RV1是人类前列腺癌上皮来源的细胞株，移植到小鼠体内进行去势诱导后连续传代获得。该细胞系中AR表达呈阳性，且前列腺特异性抗原（PSA）也呈阳性表达。CWR22RVI细胞系的生长对DHT刺激不敏感，但EGF,TGFβ-1可刺激其生长。CWR22RV1细胞株的培养方法比LNcaP细胞株的更容易。

【材料】

1．含10％胎牛血清的RPMI 1640,PBS缓冲液，抗生素（青、链霉素），胰蛋白酶等。

2．玻璃吸管，离心管，培养瓶，移液器。

【方法】

1．细胞在培养瓶中生长到80％～90％左右，但仍为单层时，可进行传代。

2．将培养瓶中的培养液弃掉。

3．向培养瓶中加入约1 ml的PBS缓冲液，洗一下，弃掉洗液。再重复洗细胞操作1次。

4．加入1 ml胰酶，放入C0₂培养箱孵育约3分钟。

5．待倒置显微镜下观察到细胞变圆，彼此之间有空隙时，加入1 ml培养液终止消化。

6．用玻璃吸管轻轻吹打细胞，至镜下细胞基本呈单细胞状态。

7．将细胞悬液移入离心管中，1000r/min，离心5分钟。

8．离心完成后，弃掉上清液，仅保留管底的细胞沉淀，加入2ml培养液，重悬细胞。

9．向装有约4ml RPMI 1640培养液的新培养瓶中加入细胞悬液1 ml，吹散，分装培养瓶后，放入37℃,5% C0₂培养箱继续培养。

（三）PC-3细胞株的培养

PC一细胞为前列腺癌骨转移细胞系，细胞贴壁生长，呈梭形或多角形，较大。该细胞系AR表达呈阴性，是雄激素非依赖性前列腺癌细胞系，用F12 (10% FBS )培养基培养细胞。每2～3天传代一次。

【材料】

1．含10％胎牛血清的F12,PBS缓冲液，抗生素（青、链霉素），胰蛋白酶。

2．玻璃吸管，离心管，培养瓶，移液器。

【方法】

1．细胞在培养瓶中生长到90％左右，但仍为单层时进行传代。

2．将培养瓶中的培养液弃掉。

3．向培养瓶中加入约1 ml的PBS缓冲液，轻洗一下，弃掉。

4．加入1 ml胰蛋白酶，放入C0₂培养箱孵育约3分钟。

5．待镜下观察到细胞变圆，彼此之间有空隙时，加入1 ml培养液终止消化。

6．用吸管轻轻吹打细胞，至镜下细胞基本呈单细胞状态。

7．将细胞悬液移入离心管中，1000r/min，离心5分钟。

8．离心完成后，弃掉上清液，仅保留管底细胞沉淀，加入2ml培养液，重悬细胞。

9．向装有约4ml F12培养液的新培养瓶中加入细胞悬液1 ml，吹散。放入37℃,5% CO₂培养箱继续培养。

（四）DU-145细胞株的培养

DU-145细胞为前列腺癌脑转移细胞系，细胞贴壁生长，呈多角形或梭形。该细胞系AR表达呈阴性，对DHT刺激不敏感，是雄激素非依赖性前列腺癌细胞系。细胞系不表达PSA。用DMEM (10% FBS )培养基培养。约每2～3天传代一次。

【材料】

含10％胎牛血清的DMEM, PBS缓冲液，抗生素（青、链霉素），胰蛋白酶，玻璃吸管，离心管，培养瓶，移液器。

【方法】

1．细胞在培养瓶中生长到80％～90%，并仍为单层时进行传代。

2．将培养瓶中的培养液弃掉。

3．向培养瓶中加入约1 ml的PBS缓冲液，洗一下，弃掉。

4．加入1 ml胰蛋白酶，放入C0₂培养箱孵育约3分钟，待镜下观察到细胞变圆，彼此之间有空隙时，加入1 ml培养液终止消化。

5．用吸管轻轻吹打细胞，至镜下细胞基本呈单细胞状态，将细胞悬液移入离心管中，1000r/min，离心5分钟。

6．离心完成后，弃掉上清液，向管底沉淀的细胞团中加入2m1培养液，重悬细胞。

7．向装有约4m1 DMEM培养液的新培养瓶中加入细胞悬液1 ml，吹散，放入37℃,5% C0₂培养箱继续培养。