病毒疫苗有多种，包括减毒活疫苗、灭活疫苗、亚单位疫苗、多肽疫苗及基因工程疫苗等。这些疫苗制备和生产过程均必须采用培养技术来大量增殖病毒，特别是减毒活疫苗的研制，需通过从自然界或反复驯化培养，筛选出对人毒力弱或无毒的病毒变异株，才能制备出减毒活疫苗。应用较多的有宿主范围突变株、温度敏感突变株，例如我国研制的脊髓灰质炎活疫苗即是采用低温传代减毒后制成的温度敏感突变株。常用的有脊髓灰质炎、麻疹、腮腺炎、风疹、乙型脑炎、甲型肝炎等减毒活疫苗。接种活疫苗相当于一次感染过程，可获得全面免疫能力。

灭活疫苗是在体外用培养细胞大量增殖病毒后，利用某些理化因素处理活病毒，使其失去感染性而保留免疫原性后制备而成，如乙型脑炎死疫苗即用地鼠肾单层细胞培养后用甲醛处理灭活制成。灭活疫苗通常在那些毒力不能减弱或可能致癌的病毒株中制备。常用的灭活疫苗还有狂犬病、麻疹、甲型肝炎、流感等灭活疫苗。

制备基因工程疫苗时，将病毒基因重组体导入真核细胞、原核细胞或哺乳动物细胞中进行表达的过程亦需要细胞培养技术。

本节以脊髓灰质炎活疫苗和狂犬病灭活疫苗为例介绍疫苗制备的简单过程。

一、脊髓灰质炎疫苗制备

接种或口服脊髓灰质炎疫苗是预防脊髓灰质炎病毒感染唯一有效的方法。脊髓灰质炎疫苗有两种：灭活脊髓灰质炎疫苗（IPV)、口服脊髓灰质炎减毒活疫苗（OPV)。均为三价混合疫苗（TIPV和 TOPV)。免疫后均可产生脊髓灰质炎Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ型的抗体，获得抗三个型别的免疫力。

我国现行的口服脊髓灰质炎减毒活疫苗（TOPV）自应用以来，取得良好的免疫效果。其优点是类似自然感染，可诱发细胞免疫和体液免疫，特别是可在肠道黏膜产生slgA，而且免疫力持久。下面简单介绍制备过程。

【材料】

1．病毒Sabin疫苗病毒株Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ型，病毒效价＞6.5 1og PFU/ml。

2．细胞Vero细胞系（绿猴肾细胞）或人二倍体细胞。

3．细胞生长液国家规定的适宜培养液，含适量灭活小牛血清。

4．维持液不含小牛血清的培养液。

5．洗涤液缓冲液。

【方法】

1．细胞培养倒置显微镜下选择生长成单层的Vero细胞培养瓶多瓶，用适宜的消化液消化细胞5～15分钟后倒掉，加入二倍量细胞生长液吹打细胞，使细胞分散，每瓶分装成2～3瓶，瓶盖不要拧得太紧，37℃,5% CO₂孵箱培养24～48小时，细胞即可形成单层，此时接种病毒最适宜。

2．接种病毒取Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ型适量疫苗病毒液（可根据原效价进行一定倍数稀释）分别接种于单层细胞培养瓶内，同时设正常细胞对照（图8-2A)。37℃吸附1小时，每15分钟摇动1次，使病毒液均匀接触细胞。吸附后加入适量生长液，置培养维持液，置33℃,5% CO₂孵箱培养。

3．培养与收获脊髓灰质炎病毒感染Vero细胞后逐日观察细胞病变，当出现细胞病变时（图8-2B)，倾去含小牛血清生长液，洗涤后换以不含小牛血清的维持液继续培养。待细胞病变发展到3+以上时，每瓶抽取样品待检定。分别收集3个型别有明显细胞病变的病毒液，澄清过滤后加保护剂于-20℃保存。三价疫苗混合，再澄清过滤后即可分装为液体疫苗成品，或制成糖丸。三价混合疫苗中，I、II,III型病毒含量分别为10⁶,10⁵,3x10⁵ TCID₅₀。

【检定】

按《疫苗规程》要求，必须进行生产用二倍体细胞外源因子检查，要做细胞鉴别试验、病毒液检定及成品检定等实验。

【应用规程】

三价活疫苗使用对象是2个月以上儿童。接种程序为2,3,4月龄各1次，每次间隔4周以上;4岁时再加强免疫1次。制成口服糖丸，每丸含1人份剂量。我国使用三价活疫苗，3次口服免疫后特异抗体阳转率可达85％～100%，流行病学效果十分显著。

二、人用狂犬病疫苗制备

狂犬病病毒（rabies virus）可以引起多种野生动物和家畜的自然感染及其在动物间的传播，并且可以通过咬伤、抓伤或密切接触等形式传播给人而引起狂犬病。狂犬病是人畜共患的自然疫源性传染病，尚无有效的治疗方法，一旦发病，死亡率近乎100%。由于发生狂犬病的潜伏期较长，一般需要数十天、数月或数年，人被狂犬或其他动物咬伤后，应尽早接种狂犬病疫苗进行预防。狂犬病疫苗是由狂犬病毒固定毒株（fixed strain）制备而成。固定毒株是野毒株通过家兔脑内连续传代后，病毒对家兔致病的潜伏期逐渐缩短并固定在4～6天左右，而且对人的致病性明显减弱，故狂犬病疫苗就用这种固定毒株来制备。

【材料】

1．病毒狂犬病毒固定毒株。

2．细胞地鼠肾细胞或人二倍体细胞。

3．细胞生长液国家规定的适宜培养液，含适量灭活小牛血清。

4．维持液不含小牛血清培养液。

5．缓冲液Hanks液。

【方法】

1．细胞培养按常规方法大量培养地鼠肾细胞（或人二倍体细胞），待细胞形成单层后接种病毒。

2．接种病毒将无菌试验合格的病毒种培养物摇碎后，经1500r/min离心10分钟，吸取上清液，根据原效价选择按1：1000～1:4000进行稀释，分别接种于单层细胞培养瓶内，同时设正常细胞对照。加入适量生长液，置33～37℃,5% CO₂孵箱培养3分钟。用Hanks液洗涤细胞后，换维持培养液，置33～37℃孵箱培养。

3．培养与收获33～37℃孵箱培养4天后收获病毒液。取样做无菌试验和病毒滴定。将无菌试验合格、病毒效价>5.5log LD₅₀/ml者澄清过滤后合并即为病毒原液。原液加入1/5000的甲醛溶液37℃ 24～48小时灭活病毒，并加入0.01％硫柳汞作为防腐剂。

4．冻干经灭活和超滤浓缩后的病毒原液再加入氢氧化铝，使其终浓度为0.4～0.7mg/ml。冻干前加入冻干保护剂1％明胶和5％蔗糖。分装时每瓶含疫苗病毒应）≥2.51U。

【应用规程】

被狂犬或其他动物咬伤后，应尽早接种狂犬病疫苗进行预防。一般于伤后第1天、3天、7天、14天和28天分别接种狂犬病疫苗1次（每安瓿l ml或2ml）进行全程免疫，儿童用量相同。接种方法是臂三角肌肌内注射。接种疫苗后14天的中和抗体效价在1:20℃1:320之间表明疫苗免疫效果良好。经验证明，被咬伤严重的病例，必须先注射抗狂犬病免疫球蛋白（或抗血清）才能得到较好的免疫效果。