某些染料如锥虫蓝可使死细胞染上蓝色，而活细胞拒染。肿瘤细胞经不同抗癌药物作用后，用锥虫蓝染色，于光学显微镜下计数蓝染细胞，即可求出不同药物的细胞毒作用。

【材料】

1．手术切除或活检钳取的新鲜肿瘤组织。

2．培养基RPMI 1640（加入15％胎牛血清，1% HEPES，青霉素100IU/ml和链霉素100ug/ml)，1% Trypsin或胶原酶，Hanks液。

3．抗癌药物视情况选择10种左右（表9-5)。按已知临床药物血浆峰值浓度（PPC )用生理盐水配成三个稀释度（0.1PPC,lPPC,10PPC)。

4. 1％锥虫蓝（trypan blue）染液。

5. 24孔培养板、显微镜、载玻片、盖玻片、计数器。

【方法】

1．取新鲜肿瘤组织，置含双抗的RPMI 1640培养液中送检（4℃,3～4小时内）。迅速移入含5％小牛血清的Hanks液中洗涤2次，去除其表面的凝血块及坏死组织等，然后移至无菌平皿内用眼科小剪将肿瘤组织剪成肉泥状，加入1640全培养基，经200目不锈钢网研磨过滤，收集单个细胞悬液（如肿瘤组织较硬，则需用Trypsin或胶原酶消化后，再用全培养基制成细胞悬液）。

2．取少许细胞悬液经锥虫蓝染色镜检，证实细胞活性在95％以上，调整细胞浓度为lx10⁵/ml备用。于24孔板内滴加0.9毫升／TL的细胞悬液，再于孔内滴加不同浓度的各种抗癌药物0.1毫升／孔，每个浓度做3个复孔，同时设对照孔（加生理盐水0.1毫升／孔），轻轻摇匀，置37℃,5% CO₂孵箱中培养24～48小时。

3．每孔加1％锥虫蓝2滴，充分吹吸混匀，滴于玻片上加盖薄片后立即于高倍镜下计数100～200个肿瘤细胞中死亡（即蓝染）的细胞数。按以下公式计算细胞毒。以细胞毒≥70％为敏感，≥50％为有效。