北京普天同创生物科技有限公司
单核细胞具有黏附在玻璃、塑料、尼龙毛、磁铁或葡聚糖凝胶的特性,而淋巴细胞(Iym-phocyte)不具备这些黏附特性,借此可去除单个核细胞悬液中的单核细胞,获得高纯度的淋巴细胞群。
(一)玻璃器皿吸附法
【材料】
1.玻璃平皿;
2.毛细管。
【方法】
将分离的外周血单个核细胞(PBMC)悬液(2x106/ml )倾入玻璃平皿中,于37℃温箱静置30~40分钟,使单核细胞黏附于玻璃平皿上。
【结果】
用毛细吸管轻轻吸取未黏附的细胞悬液,即为除去单核细胞的淋巴细胞悬液。
【注意事项】
因B细胞也有贴壁现象,用本法分离的淋巴细胞群中B细胞有所损失。此法也可用于单核细胞的分离纯化。
(二)磁铁吸附法
【材料】
1. Hanks液。
2. 6%右旋糖酐生理盐水。
【方法】
1.用Hanks液将抗凝血稀释2倍,取10ml加入试管中,再加6%右旋糖酐生理盐水溶液3ml,羟基铁1g和3mm大小的玻璃株10粒,混匀,于37℃旋转摇动10分钟。
2.用磁铁在试管外将铁屑吸至管底,将试管倾斜450,37℃放置20分钟。
【结果】
吸取上清液,即为除去单核细胞的淋巴细胞。
(三)羟基铁,乳胶分层液法
【材料】
1. 5%右旋糖酐;
2. 1 %羟基铁Hanks液;
3. 0.6 um大小的乳胶颗粒悬液。
【方法】
1.抗凝血20ml与5%右旋糖酐4ml混匀,置室温30分钟使红细胞沉降。
2.吸出富含白细胞的血浆层,将之与等体积的1%羟基铁Hanks液混合,并加一滴0.6 um大小的乳胶颗粒悬液。
3.将试管放37℃摇台上摇1小时,再将混合液用聚蔗糖一泛影葡胺分层液离心分离。
【结果】
吞噬铁末和乳胶的单核细胞比重较大沉于管底,所得淋巴细胞纯度可达到95%。
(四)吸附柱过滤法
将单个核细胞悬液注入装有玻璃纤维或葡聚糖凝胶SephadexGlO的柱层中,凡有黏附能力的细胞绝大部分被吸附而黏滞在柱层中,从柱上洗脱下来的细胞主要是淋巴细胞。此法简单易行,对细胞极少损害。
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