一.EL-3活性测定

【原理】

IL-3能刺激骨髓中多种血细胞集落形成，故又称为多克隆刺激因子，主要由活化的T细胞产生。IL-3的生物学活性非常广泛，但最主要的活性是促进造血干细胞的定向分化和增殖，表现为促进多种血细胞，包括淋巴细胞、单核／巨噬细胞及红系细胞及巨核系细胞等的分化、成熟以及集落的形成。MC-9为依赖IL-3的肥大细胞系，在含IL-3的完全培养基中长期生长及增殖。

【材料】

MC-9细胞培养于完全培养基或含适当的活化的T细胞系的培养上清液的完全培养基中，细胞浓度为5x10⁵/ml。

【方法】

1．收集MC-9细胞，用不含IL-3的完全培养基将MC-9细胞洗涤2次，以除去IL-3。

2．将细胞重悬于不含IL-3的培养基中，细胞浓度为2x10⁵/ml。

3．倍比稀释标准IL-3及待检IL-3，然后加入96孔细胞培养板中，每孔加入50ul。

4．再在每孔加入50ul细胞悬液，使每孔细胞密度为10⁴个。

5．将培养板置于37℃,5% CO₂孵箱中培养24小时。

6．然后按³H-TdR或MTT法进行检测。

【结果】

参考IL-1和IL-2检测相关的方法。

【注意事项】

试验中需加抗鼠IL-4的抗体，因MC-9对IL-4也有反应。

二.IL-4活性测定

【原理】

CTL44对IL-4刺激非常敏感，并对IL-4的刺激增殖呈量效关系。而对IL-2反应却是低下的。

【材料】

1．细胞系源于CTL/L的亚细胞系CTL44 ;

2. ³H-TdR;

3. IMDM细胞培养基；

4. IL-4标准品。

【方法】

1．收集处于对数生长期的CTL44，用Hanks液洗3遍，以除去残留的细胞因子。用完全IMDM液配成1x10⁵/ml的细胞悬液。

2．在％孔板中加入50ul细胞悬液和标准品或经倍比稀释的样品50ul。

3．将培养板置于5% C0₂,37℃，孵育24小时后，每孔加入22.2kBq的3H-TdR,6小时后用多头细胞收集器收细胞于玻璃纤维滤纸，烘干后，液闪计数器计算每分计数值。

【结果】

引起CTL44细胞最大半数增殖的样品稀释孔中的IL-4含量为lU。

【注意事项】

本试验只适用于小鼠IL-4活性的检测。

三.IL-6活性测定

【原理】

IL-6能刺激其依赖细胞MH60-BSF2的增殖，并且两者呈量效关系。

【材料】

1．细胞系 MH60-BSF2；

2. 10% FCS的RPMI 1640培养液；

3. MTT 浓度为5 mg/ml。

【方法】

1．将待测样品和标准品IL-6倍比稀释后，加入96孔板，100微升／孔。设3个复孔，并设阴性对照和阳性对照。

2．每孔加入RPMI 1640洗过的MH60-BSF2细胞悬液（1x10⁵/ml)100ul。置37℃,5%C0₂孵箱中孵育48小时。

3．加入MTT液（5mg/ml),50微升／孔，继续培养4小时后离心去上清液，加入0.04mol/L盐酸异丙醇溶液，200微升／孔，吹打混匀后在酶标仪上读取OD值。

【结果】

以OD值对IL-6标准品稀释倍数的对数作标准曲线。测得样品的OD值后，从标准曲线即可得出样品IL-6的含量。

【注意事项】

因MH60-BSF2细胞易变异，所以应2个月左右将其克隆一次。