一、实验目的

    掌握冻兔肉中六六六和DDT残留量的提取、分离、净化方法及气相色谱分析过程。

    二、实验原理

    样品经消化分解去除蛋白质与脂肪等杂质，并以石油醚提取、浓硫酸磺化净化后，以标准品为对照，采用气相色谱法，可测定样品中六六六和DDT的含量。

    三、仪器与试材  

    1．仪器与器材

    气相色谱仪(带电子捕获检测器)、旋转蒸发器、组织捣碎机等。

    2．试剂

    除特别说明，实验中所用试剂均为分析纯，水为去离子水或蒸馏水。

    (1)常规试剂：HClO4(优级纯)、冰醋酸、无水Na2SO4(600℃下干燥4h，备用)、石油醚(优级纯)、浓H₂SO₄。

    (2)标准品：甲体一六六六(α—BHC)、乙体六六六(β一BHC)、丙体一六六六(γ—BHC)及丁体一六六六(δ一BHC)，p,p’—DDT、o，p’一DDT、p，p’一DDD和．p，p’一DDE，纯度均大于99％。

    (3)常规溶液：HClO4一冰醋酸混合酸(1+1，体积比)、：Na2SO4溶液(2％)。

    (4)农药标准储备液(100μg／mL)：精密称取α—BHC、β—BHc、γ—BHC和δ一BHC、p，p’—DDT、o，p’一DDT、p，p’一DDD和．p，p’一DDE各10mg，以石油醚溶解并定容至100mL。

    (5)农药混合标准使用液(1μg／mL)：吸取lmL各种标准储备液加入100mL容量瓶中，用石油醚定容。

    3．实验材料

    2—3种冷冻兔肉，各250g。

    四、实验步骤

    1．样品处理

    (1)将100g兔肉样品切成1cm3大小的小块，用组织捣碎机捣碎。

    (2)称取5．0g捣碎的兔肉于100mL具塞锥形瓶中，加入50mL HClO4一冰醋酸混合酸，于70℃恒温水浴中振荡约2h，至固体完全消化、溶解。

    (3)将消化液转移至250mL分液漏斗中，用10mL石油醚洗涤锥形瓶，洗涤液合并于分液漏斗中。

    (4)用90mL石油醚分3次萃取消化液中的有机氯农药残留。石油醚萃取液合并于另一个250mL分液漏斗中，加入10mL浓H2SO4，轻轻振摇1～2次，待溶液分层后，弃下层酸液。重复4～5次，直至下层酸液为无色。

    (5)用200mL—Na₂SO₄溶液分2次洗涤石油醚萃取液，过无水Na₂SO₄柱后，于40℃下旋转蒸发至近干，通入氮气吹干，准确加入1.0mL石油醚，溶解后待用。

    2．标准曲线的绘制

    (1)吸取农药混合标准使用液0、0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.8mL、1.6mL、3.2mL，分别置于100mL容量瓶中，以石油醚定容，浓度分别为0、1.0ng／mL、2.0ng／mL、4.0ng／mL、8.0ng／mL、16.0ng／mL、32.0ng／mL。在气相色谱仪上，分别测定各浓度标准液的峰面积，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

    (2)参考色谱条件：色谱柱为HP ultra-2型石英毛细管柱(25m×0.32mm，0.52pm)；色谱柱升温程序为80℃ ─15℃/min─→180℃(恒温7min)─10℃/min─→230℃(恒温7min)─30℃/min─→280℃；进样口温度为240℃；检测器温度为320℃；氮气作载气，流速为3mL／min；进样量为2μL。

    3．样品测定

    在上述条件下，将样品提取液导入气相色谱仪中，测定各成分的保留时间和峰面积。与标准品比较进行定性和定量分析，从标准曲线上查找样品提取液中各成分的浓度。

    4．计算

    按下式计算样品中各种六六六和DDT异构体的含量：

    x=cV/m

式中，x为样品中各种六六六和DDT异构体的含量，μg／kg；c为样品处理液中各种六六六和DDT异构体的浓度，ng／mL；V为样液的定容体积，mL；m为样品的质量，g。

    五、注意事项

    1．实验步骤中的色谱条件仅供参考，具体的分析条件应该根据所用气相色谱仪的型号，参考说明书中的条件进行。

    2．为了控制样品提取液中有机氯农药残留在标准曲线的线性范围内，可以采用适当的稀释或者浓缩方法，对样品提取液进行处理。

    3．在本实验条件下，农药标准品的出峰顺序为α一六六六、β—六六六、γ一六六六、六六六、δ一BHC，p,p’—DDE、o，p’一DDT、p，p’一DDD和．p，p’一DDT。

    六、思考题

    1．叙述你在实验中使用的气相色谱仪的型号、各部件的名称和功能。

    2．叙述在样品处理过程中加入HClO₄一冰醋酸混合酸的作用。

    3．为什么有机氯农药残留在环境中不容易被分解?