一、实验目的

    掌握蔬菜中拟除虫菊酯类农药氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯残留的提取、净化技术，以及气相色谱测定的原理和方法。

    二、实验原理

    样品中残留的氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯等拟除虫菊酯类农药经丙酮一石油醚提取、色谱柱净化、浓缩后，经气相色谱柱分离，进入到电子捕获检测器中检测。根据保留时问和峰高，与标准品比较实现定性和定量分析。

    三、仪器与试材

    1．仪器与器材

    气相色谱仪(附电子捕获检测器)、组织捣碎机、振荡器、可调电炉、恒温水浴锅等。

    2．试剂

    除特别说明外，实验中所用试剂均为分析纯，水为去离子水或蒸馏水。

    (1)常规试剂：石油醚(沸程30～60℃，重蒸)、丙酮(重蒸)、无水Na₂SO₄(550℃灼烧4h)、色谱用中性氧化铝(550℃灼烧4h后，用前于140℃烘烤1h，加3％水脱活)、色谱用活性炭(550℃灼烧4h)、脱脂棉(经正己烷洗涤后，干燥)。

    (2)农药标准品：氯氰菊酯(cypermethrin，纯度≥96％)、氰戊菊酯(fenvalerate，纯度≥94．4％)；溴氰菊酯(deltamethrin，纯度≥97．5％)。

    (3)标准储备液：用重蒸石油醚或丙酮分别配制0.2μg／mL氯氰菊酯、0.4μg／mL氰戊菊酯、0.1μg／mL溴氰菊酯的标准储备液。

    (4)标准使用液：吸取10mL氯氰菊酯、10mL氰戊菊酯、5mL溴氰菊酯的标准储备液于25mL容量瓶中，加石油醚或丙酮至刻度，摇匀，得到浓度分别为0.08 μg／mL、0.16μg／mL和0.02μg／mL的氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯的标准使用液。

    3．实验材料

    1～2种新鲜小白菜、萝卜、辣椒，各250g。

    四、实验步骤    

    1．样品提取  

    (1)称取l00g切碎的小白菜、萝卜和辣椒，以组织捣碎机分别捣碎匀浆。

    (2)取20.00g捣碎样品于250mL具塞锥形瓶中，加丙酮和石油醚各40mL摇匀，振荡30min，静置分层后，取出上清液4mL用于净化。

    2．样品净化

    (1)将内径1.5cm、长15cm的玻璃色谱柱垂直固定，玻璃色谱柱底端铺垫少量脱脂棉后，依次加1cm高的无水Na₂SO₄、3cm高的中性氧化铝、0.03g色谱用活性炭、2cm高的无水Na₂SO₄。

    (2)以35mL石油醚淋洗柱子，弃去淋洗液，待石油醚层下降至上层的无水Na₂SO₄时，迅速将试样提取液加入，待其进入无水Na₂SO₄层时，以30mL左右的石油醚淋洗液淋洗。

    (3)收集淋洗液于尖底定容瓶中，以氮气流吹干、浓缩至1mL，待测。

    3．测定

    (1)分别取2μL标准使用液和样品浓缩液于气相色谱仪中进行分析。    

    (2)通过与标准品的出峰时问和峰高进行比较，确定样品中拟除虫菊酯残留的种类和含量。

    (3)参考色谱条件：色谱柱为玻璃柱[3mm(内径)×1.5m或2m]，内填充3％OV-101／Chromosorb W (AWDMC S)，80～100目；柱温为245℃，进样El和检测器温度为260℃；高纯氮气为载气，流速为140mL／min。

    4．计算    

    按下式计算样品中拟除虫菊酯类农药残留的含量：

    x=h'cV/hm

    式中，x为试样中某种拟除虫菊酯农药残留的含量，mg／kg 为标准品的峰高，mm ；h’为样品液的峰高，mm；c为标准溶液的浓度，μg／mL；V为试样的最终定容体积，mL；m为试样的质量，g。

    五、注意事项

    实验步骤中的色谱条件仅作参考，具体条件应该根据气相色谱仪的品牌和型号，依据说明书，通过预备实验进行确定。

    六、思考题

    1．简述拟除虫菊酯残留对人体的危害。

    2．请分别说明色谱柱中无水Na₂SO₄、中性氧化铝和活性炭的作用。