一、实验目的

掌握HPLC分析果汁饮料中糖精钠含量的原理与方法。

二、实验原理

果汁样品以氨水调pH至近中性后，取滤液经高效液相色谱柱分离后，以紫外检测器测定，根据保留时间和峰高，与标准品比较，进行定性和定量分析。

三、仪器与试材

1．仪器与器材

高效液相色谱仪(附带紫外检测器)。

2．试剂

除特别说明外，实验中所用试剂均为分析纯，水为去离子水或蒸馏水。

(1)常规试剂：甲醇(以0．45μm滤膜过滤)、NH4Ac、浓氨水。

(2)常规溶液：氨水(1+1，体积比)、NH。Ac溶液(0.02mol，／L，以0．45μm滤膜过滤)、CH3OH—NH4Ac溶液(5+95，体积比)。

(3)糖精钠标准储备液(1．0mg／mL)：取0．085lg经120℃烘干4h后的糖精钠(C6H4CONNaSO2)，加水溶解并定容至100mL。

(4)糖精钠标准使用溶液(0．10mg／mL)：取糖精钠标准储备液10．0mL放入100mL容量瓶中，加水至刻度，经0．45μm滤膜过滤。

3．实验材料

2～3种不同的果汁饮料，各50mL。

四、实验步骤

1．样品处理

称取10．00g果汁饮料，以氨水调pH至7，加水定容至100mL，以4000r／min离心10min，上清液过滤(0．45μm滤膜)，备用。

2．标准曲线的绘制

(1)配制浓度为10μg／mL、20μg／mL、40μg／mL、60μg／mL、80μg／mL、100μg／mL标准溶液，供HPLC分析。

(2)以浓度为横坐标，相应峰高值为纵坐标，绘制标准曲线。

(3)参考色谱条件：YWG—C18不锈钢色谱柱(4．6mm×250mm，10μm)；流动相为CH3OH—NH4Ac溶液，流速为lmL／min，：紫外检测器，波长为230nm，灵敏度为0．2AUFS；进样量为10ML。

3．样品测定

(1)在上述色谱条件下，将样品处理液注入高效液相色谱仪，记录色谱图。

(2)与标准品色谱图比较，根据保留时间进行定性，根据峰高从标准曲线上查出样品处理液中糖精钠的浓度。

4．计算

根据下式计算样品中糖精钠的浓度：

x=m0/[m×(V1/V2)]

式中，x为样品中糖精钠的含量，g／kg；m0为进样体积中糖精钠的质量，mg；V2为进样体积，mL；V1为样品稀释液的总体积，mL；m为样品的质量，g。

五、注意事项

1．实验步骤中的色谱条件仅作参考，在实际实验过程中应该根据仪器型号和实验室条件进行调整。

2．两次重复实验结果误差的绝对值不得超过其算术平均值的10％，否则应该调整实验条件，重新实验。

3．在本实验条件下，可以同时测定饮料中的苯甲酸、山梨酸和糖精钠的含量。

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