统一糖化血红蛋白检测标准势在必行

糖尿病是一种多病因的代谢疾病，具有慢性高血糖、伴随因胰岛素分泌不足或作用无效引起的糖、脂肪和蛋白质代谢紊乱，可导致不同脏器的(长期)损伤、功能障碍和衰竭。截至2003年，全球糖尿病患者数量已经接近2亿，预测2005年会再增加一倍，使全球人群患病率从0.67%上升到2.3%。就中国而言，现在糖尿病患者已经达到4000万，占全球糖尿病患者总数的1/5，目前我国每年用于治疗糖尿病的直接医疗成本超过180亿元人民币，占全部医疗费用的4%。因此加强糖尿病的诊断与预防具有非常现实而重要的意义。

糖尿病检测的主要指标

实验室检查是目前糖尿病诊断与监测的主要方法，它不仅能够诊断是不是患有糖尿病，还能够鉴别患者得的是Ⅰ型还是Ⅱ型糖尿病，并对治疗和控制效果进行检测。目前，糖尿病的实验室检查主要包括四个方面，分别是葡萄糖水平(血、尿、糖耐量)检查、胰岛素及C肽检查、糖化血红蛋白A1c(HbA1c)检查和糖尿病相关抗体检测。

糖化血红蛋白(GHB)是血红蛋白与糖类(如葡萄糖、6-磷酸葡萄糖或1.6-二磷酸果糖)经非酶促结合而成的。它的合成过程是缓慢且不可逆的。它积累并持续于红细胞120天生命期中，合成速率与红细胞所处环境中糖的浓度成正比。其中，HbA1c约占GHB的60%～70%，且结构稳定。另外，HbA1c在总血红蛋白中所占的比例能够反映测定前2～3个月内平均血糖水平。 
　　1983年到1993年在美国29所医学中心通过对1441组病例进行的糖尿病控制和并发症临床研究(DCCT)表明了糖尿病患者病程的发展和合并症与血糖控制的密切关系，还证明了血浆葡萄糖水平与HbA1c之间的关系。DCCT结果表明，控制血糖可以减少合并症危险，其中可以使糖尿病眼病减少70%，肾病减少50%，神经系统疾病减少60%。 
　　在此基础上，美国糖尿病协会(ADA)提出了糖尿病治疗的建议，指明测定HbA1c的重要性，并在全世界范围内被广泛应用。 

　　存在不同检测方法 
　　GHB检测用于常规实验室始于20世纪70年代末期，且稳定发展至今，成为评价血糖控制水平的重要指标。GHB实验通常检测由血红蛋白和葡萄糖经过缓慢过程且非酶促反应所形成的稳定部分。由于红细胞允许葡萄糖自由渗透，血液样本中糖化血红蛋白水平反映过去120天内的平均血糖水平。 
　　目前，临床实验室中应用的GHB测定方法主要分为两类：一是基于GHB与非GHB的电荷不同，如离子交换层析、电泳和等电聚集方法；二是基于血红蛋白上糖化基团的结构特点，如亲和层析和免疫实验。 
　　而HbA1c的测定方法则包括离子交换层析、亲和层析法和免疫分析。其中，离子交换层析法是基于血红蛋白β链末端缬氨酸糖化后所带电荷不同而建立的。亲和层析法是采用硼化琼脂糖为载体，利用其与GHB残基中的葡萄糖特异结合的特性达到分离测定目的。免疫分析依靠针对GHB β链N末端4～8个氨基酸的单克隆或多克隆体，结合比色或比浊方法，以糖化蛋白为标准，测定HbA1c的含量。 

　　临床应用需要检测标准统一 
　　但是，离子交换方法会受到如下干扰：胎儿血红蛋白(HB-F)与HbA1c的带电性很相近，在离子交换HPLC分析图上可能呈现一个独立的Hb-F峰，也可能与HbA1c峰重叠(这要视离子交换柱的分离能力而定)。亲和层析的特点是，只要血红蛋白分子上有糖基化结构，不论它结合在哪个氨基酸上，都能被硼酸盐亲和柱捕捉到。免疫方法受到的干扰，若使用针对β链N末端6个氨基酸结构有特异性的单克隆抗体，但对Hb-F的r链N末端没有特异性，因为在6个氨基酸中有3个不一样，使抗体捕捉不到糖化的Hb-F，使测量值偏低，测量结果依Hb-F的量的多少等比例减少。 
　　为此，美国临床化学协会(AACC)在1993年成立分委会进行GHB的统一测量标准的工作。本项工作由美国国家糖化血红蛋白统一测量标准计划(NGSP)指导委员会承担。该委员会由执行委员会和实验室网络组成，其中实验室网络包括管理核心、中心参考实验室、参考实验室和二级参考实验室。

该计划的目的是校准实验室测定方法，为测定方法和实验室颁发合格证书，指导常规实验室开展室间质量评价活动，于1996年完成。
　　通过本项计划，获得的主要效益包括两个方面：首先，临床实验室可以通过能力验证活动获得，这种活动通常使用由网络实验室定值的新鲜血样本，评估结果的偏差和实验室间及方法间的可比性；其次，标准方法的使用让实验室检测结果与DCCT的实验结果结合起来，从而更好地服务于临床医生和糖尿病患者。 
　　这一工作使得美国临床实验室间GHB测定的结果有了很大的变化，据有关资料报道， 2000年，美国90%的实验室以HbA1c报告GHB的结果；所有参加NGSP活动实验室测定结果的室间变异系数(CV)小于5%；HbA1c检测结果与靶值的偏差小于0.8%。目前美国绝大多数实验室报告的结果都能溯源到DCCT结果，使对糖尿病及其并发症的治疗和预防工作有了统一的参考标准。目前，美国临床实验室标准委员会(NCCLS)采纳了NGSP的GHB测定的统一测量标准模式。 
　　1995年国际临床化学组织(IFCC)建立了工作组，以研发HbA1c测定的标准物质和标准方法为目的。在其建立的实验室网络中，使用纯化的HbA1c和HbAO进行校准，并致力于建立与NGSP网络结果间的联系。 
　　实验结果显示，IFCC的HbA1c结果略低于NGSP的结果。而现在，在美国NGSP的中心参考实验室内也将建立IFCC参考方法。