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细菌的分离培养的培养基制备

发布时间:2017-08-06 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:1111

(一)培养基配制的基本过程

1.配制溶液向容器内加入所需水量的一部分,按照培养基的配方,称取各种原料,依次加入使其溶解,最后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质,需加热溶解,加热过程所蒸发的水分,应在全部原料溶解后加水补足。配制固体培养基时,先将上述已配好的液体培养基煮沸,再将称好的琼脂加入,继续加热至完全融化。并不断搅拌,以免琼脂糊底烧焦。

2.调节pH值用pH试纸(或pH电位计、氢离子浓度比色计)测试培养基的pH值,如不符合需要,可用10%HCI溶液或10 % NaOH溶液进行调节,直到调节到配方要求的pH值为止。

3.过滤用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时,最好折叠成6层,用滤纸过滤时,可将滤纸折叠成瓦棱形,铺在漏斗上过滤。

4.分装已过滤的培养基应进行分装。如果制作斜面培养基、液体或半固体培养基,必须将培养基分装干试管中。如果制作平板培养基,则必须将培养基分装于三角烧瓶内。

5.加棉塞分装完毕后二需要用棉塞堵住管口或瓶口。加棉塞的主要目的是过滤空气,避免污染。塞好棉塞的试管和三角烧瓶应盖上厚纸并用绳捆扎,进行高压蒸汽灭菌处理。

(二)几种常用培养基的制作

目前,有各种成品培养基供应,不仅有国家审批文号,使用方便、质量可靠,而且添加了促进细菌生长的物质,营养更加丰富,有利于标准化。另外,国内外有许多家公司供应干粉培养基,按照说明进行操作,使用也十分便捷。一般不再进行各种培养基成分的称量配制。

以下简要介绍几种培养基的制备。

1.营养培养基

蛋白胨10g                 牛肉浸出粉3g

氯化钠 5g                 琼脂15~20 g

蒸馏水                  1000 mL

取上述成分混合加热溶解后,调节pH7.5±0.1,煮沸滤清后高压灭菌。

2.血平板培养基营养琼脂培养基熔化,冷却至55℃左右,加入无菌绵羊血(占培养基量5%~10%),摇匀后无菌操作倾注平板。

3.麦康凯琼脂培养基(MacC)

蛋白胨20 g                  1%中性红指示液 2. 5 ml,

乳糖10 g                 琼脂15~20 g

牛胆盐5g                 氯化钠5g

蒸馏水1000 mL

除乳糖、指示液、牛胆盐及琼脂外,取上述成分混合,加热溶解,调节pH7.5±0.1,加入琼脂,加热溶化后,再加入其余各成分,摇匀,分装,灭菌,冷却至60℃,倾注平皿。

4.沙门、志贺菌属琼脂培养基(SS)

蛋白胨5g                 硫代硫酸钠8.5 g

牛肉浸出粉5g                 中性红指示液2.5 ml

乳糖10 g                 亮绿试液0.33 ml

牛胆盐8.5 g                 琼脂15~20 g

枸橼酸钠8.5 g                 枸橼酸铁铵1g

蒸馏水1000 mL

除乳糖、指示液和琼脂外,取上述成分混合,加热溶解,调节pH7.5±0.1,滤过,加入琼脂,加热溶化后,再加入其余各成分,摇匀,121℃灭菌15 min。冷却至60℃,倾注平皿。

5, M-H培养基用Mueller-Hintan琼脂(水解酪蛋白琼脂)配制,淀粉为保护性胶体,能对抗细菌的毒性物质;水解酪蛋白、牛肉浸膏(提供细菌氮源的主要营养物质)。药敏试验中,为保证结果重复性及抑菌环的大小与清晰,因此,培养基不含对抗生素及磺胺药物的拮抗剂。

成品38 g,加入蒸馏水1000 ml,,PH7.1~7.5。将上述成分混合,加热溶化,校正pH值,121℃灭菌15 min。冷却至50℃左右,无菌定量吸取20 mL于直径为90 mm的无菌平板内,琼脂厚度约4 mm,待凝固后冷藏备用。

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