（一）检验程序

链球菌检验程序见图14-2。

（二）标本采集

根据病种不同及检验项目不同采取不同标本。细菌培养可采集脓汁、咽拭子和血液等；检测抗体则采集血清标本。

（三）标本直接检查

1．染色镜检取标本涂片、革兰染色镜检，若见链状排列的革兰阳性球菌，则有助于无污染标本的诊断。

2．检测抗原采用免疫学方法检测咽拭子标本中的A群链球菌抗原、女性阴道分泌物标本中的B群链球菌抗原。

（四）分离培养

血液、脑脊液标本增菌后再分离培养，其他标本可直接接种于羊血平板分离培养，经35～37℃孵育24～48 h，观察菌落大小、外形及溶血情况。

（五）鉴定

1．初步鉴定 取可疑菌落涂片、革兰染色镜检，如见到链状排列的革兰阳性球菌，应进一步做触酶试验，链球菌触酶试验为阴性，该试验主要用于区别葡萄球菌属和口腔球菌属属间鉴别见表14-3。

表14-3触酶阴性或弱阳性革兰阳性球菌各菌属鉴别

注：LAP代表亮氨酸氨基肽酶;S代表敏感;R代表耐药；V代表可变。

2.β溶血链球菌鉴定

(1) Lancefield群抗原检、测。可疑菌落与分群血清作凝集试验：①与B群凝集的为无乳链球菌：②与F群凝集且菌落直径小于0.5 mm的为米勒链球菌；③与A,C,G群凝集的不能确定菌种。需根据菌落大小及生化反应进一步鉴定（表14-4)。

表14-4β溶血链球菌的鉴定

注：NA表示无资料；BGUR表示β-D-L葡萄糖甘酸酶。

(2) PYR试验。化脓性链球菌产生的吡咯烷酮芳基酰胺酶能水解吡咯烷酮β-蔡基酰胺，加N,N-二甲氧基肉桂醛试剂显桃红色。方法是将待检菌涂在含有毗咯烷酮β萘基酰胺（PYR）的纸片上，置于35℃孵育5 min，再往纸片上滴加显色剂，纸片呈红色为阳性。用于鉴定能产生吡咯烷酮芳基酰胺酶的细菌，如肠球菌、链球菌属中的化脓性链球菌、草绿色气球菌和某些凝固酶阴性葡萄球菌等。

(3) VP试验。挑取平板上孵育过夜菌落置于2 mL VP肉汤中，孵育6h后加入VP试剂，摇匀30 s，出现桃红色者为阳性，该试验可用于鉴别A,C,G群大菌落和小菌落的细菌。

(4) CAMP试验。无乳链球菌能产生可扩散的细胞外蛋白（CAMP因子），提高金黄色葡萄球菌β溶血活性，在血平板上两种细菌交界处溶血能力增强，形成箭头状透明溶血区。该试验是B群链球菌与其他链球菌鉴别的一个重要试验。

(5) β葡萄糖醛酸苷酶(BLUR）试验。可用于鉴别C,G群大菌落和小菌落的细菌。

(6)杆菌肽敏感试验。A群链球菌对0.04U杆菌肽几乎100％敏感，临床分离菌株B、C、G群链球菌偶敏感，其他群耐药，该试验可作为A群链球菌重要的鉴定试验。

3．非β溶血链球菌鉴定牛链球菌具有D群多糖抗原，6.5％ NaCl生长试验阴性，PYR阴性，胆汁七叶苷阳性，与其他草绿色链球菌鉴别见表14-5。

表14-5非β溶血链球菌鉴别

4．其他草绿色链球菌鉴定这类细菌为革兰阳性球菌，不存在B,D群抗原，触酶阴性，血平板草绿色溶血，胆汁七叶苷阴性，Optochin耐药，6.5％ NaCl生长试验阴性，万古霉素敏感。该类细菌较多，目前常规鉴定方法鉴定到种有困难，通常鉴定到群，见表14-6。

表14-6草绿色链球菌鉴别

（六）抗链球菌溶血素O杭体检测

采集血清标本，用免疫学方法（乳胶凝集法或溶血抑制法）测定抗链球菌溶血素O抗体效价，可用于风湿热的辅助诊断，活动性风湿热患者其效价常超过400单位。