肺炎支原体(M.pneumoniae,Mp)是引起人类支原体肺炎的病原体，支原体肺炎占非细菌性肺炎的1/3以上，其病理变化以间质性肺炎为主。

一、生物学特性

1．形态染色肺炎支原体无细胞壁，最外层为细胞膜，主要呈丝状，长2～5um，在丝状体尖端有一特殊球状结构，有时可见球形或双球形的菌体。革兰染色镜检阴性，但不易着色，姬姆萨染色呈淡紫色。

电镜下观察，支原体的胞浆外围有以三层结构组成的细胞膜，厚7.5～10 nm，内、外两层为蛋白质及糖类，中层系脂类，其中胆固醇含量约占36％细胞质内含无数颗粒状核蛋白体、mRNA,tRNA以及分散的环状双股DNA,DNA分子质量仅为大肠埃希菌的1/6左右。部分肺炎支原体菌株在细胞膜外还有一层荚膜，主要成分为多糖，与支原体的致病有关。

2．培养特性营养需求高于一般细菌，培养基中需加入10％～20％人或动物血清，主要用于提供支原体自身不能合成的胆固醇及长链脂肪酸。初次分离时尚须加入10％的酵母浸膏，以提供核苷前体和维生素等。肺炎支原体在5％CO₂的条件下生长较好，最适pH值为7.8～8.0,PH值为7.0以下容易死亡，最适培养温度为36～37℃。

支原体主要以二分裂方式繁殖。肺炎支原体生长较慢，在液体培养基中常呈极浅淡的混浊，在固体培养基上37℃培养，一般于5～7天后出现菌落。菌落直径为10～100um,初次分离时菌落为细小的草莓状，多次传代后可呈典型的“油煎蛋”样菌落(图25-1)。菌落能吸附豚鼠红细胞；可产生溶血素，能迅速而完全地溶解哺乳动物红细胞。

图25-1肺炎支原体“油煎蛋”样菌落(×100)

细菌L型也缺乏细胞壁，两者在许多生物学性状上相似，应注意加以区别，支原体和细菌L型的比较见表25-1。

表25-1支原体和细菌L型的比较

3．生化反应常采用葡萄糖、精氨酸、尿素等生化反应鉴别支原体，人类主要支原体的生物学性状见表25-2。

表25-2人类主要支原体的生物学性状

4．抗原与分型支原体无细胞壁，其抗原性主要取决于细胞膜上的蛋白质和糖脂。糖脂的抗原性很强，但特异性较差，与多种其他支原体、细菌及宿主细胞有共同的抗原决定簇。所有肺炎支原体均具有相对分子质量为170000的Pl外膜蛋白和43000的菌体蛋白，特异性强，可刺激机体产生持久的高效价抗体。部分肺炎支原体菌株在细胞膜外还有一层荚膜，主要成分是多糖，也具有一定的抗原性。支原体血清分型常采用生长抑制试验(growth inhibition test, GIT)和代谢抑制试验(metabolism inhibition test,MIT)，这两种方法特异性和敏感性高，能将支原体分成若干血清型。

5．基因组肺炎支原体M129株基因组全长816394 bp，为环状双股DNA, G+C的摩尔分数为40％。

6．抵抗力支原体不耐热，45℃ 15～30 min或55℃ 5～15 min即被杀死。耐冷，在-70℃或液氮中可长期冻存。对干燥敏感，干燥的标本难以分离出支原体。对酸、有机溶剂及可作用于胆固醇的物质（如皂素、两性霉素B等）敏感，但对碱、结晶紫和醋酸铊有抵抗力。对作用于细胞壁的抗菌药物（如青霉素、头孢菌素等）不敏感，但对干扰蛋白质合成或作用于其核蛋白体的抗菌药物（如红霉素、螺旋霉素、多西环素等）敏感。

二、临床意义

肺炎支原体感染呈世界性分布，但以温带为主。四季均可发病，以秋、冬季节多见，大流行很少，小流行可呈周期性发生，间隔时间为3～5年，平时散在发病。传染源为患者或带菌者，主要经飞沫传播，患者以儿童和青少年居多，多在学校、家庭和军队中流行。

肺炎支原体主要侵犯呼吸系统，潜伏期2～3周，首先引起上呼吸道感染，然后下行引起气管炎、支气管炎和肺炎。以隐性感染和轻型感染较常见，也可导致严重肺炎或伴发肺外组织、器官病变，如皮肤黏膜的斑丘疹、溶血性贫血、心肌炎、心包炎、脑膜炎或脑炎等。

肺炎支原体通过滑行运动穿过黏膜上皮细胞纤毛层，尖端的特殊结构使其黏附在上皮细胞表面的受体上。P1蛋白为主要黏附因子，该黏附作用可抑制纤毛活动、破坏上皮细胞，同时释放过氧化氢等有毒代谢产物进一步引起局部组织损伤。此外，致病性也与迟发性超敏反应有关。

三、微生物学检验

（一）检验程序

肺炎支原体的检验程序见图25-2。

图25-2肺炎支原体的检验程序

（二）标本采集

可采集患者痰液、咽拭子、鼻咽洗液、支气管洗液、血清标本等。肺炎支原体有黏附细胞作用，故以拭子标本为好。支原体对热和干燥敏感，取材后应立即接种，或置转运培养基（蔗糖-磷酸盐缓冲溶液中），4℃可保存72 h。若为组织块，应切碎或研磨后再接种。培养基中加入青霉素可抑制杂菌的生长。

（三）标本直接检查

1．显微镜检查革兰染色镜检阴性，但不易着色；电镜下观察无细胞壁，可与细菌鉴别。

2．核酸检测PCR检测主要包括普通PCR、实时荧光定量PCR及巢氏PCR等，目前临床上以荧光定量PCR开展最为广泛。用于PCR检测的靶基因主要有P₁基因、ATPase框架基因、16S rRNA基因等。

（四）分离培养与鉴定

常采用Hayflick固体或液体培养基（以牛心消化液为基础，另加入小牛血清、新鲜酵母浸液、抑菌剂等）。肺炎支原体对醋酸铊、美蓝、青霉素不敏感，在培养基中加入适当浓度的此类物质可防止杂菌污染。

初次分离时生长缓慢，通常先将标本接种于含葡萄糖、酚红和美蓝指示剂的液体培养基中增菌，1周后培养基由紫色变为绿色，液体清晰，可考虑有肺炎支原体生长，此时可转种于固体培养基上，在含5％ CO₂环境下培养。初次分离一般1～2周长出致密圆形的菌落，常不出现“油煎蛋”状，经数次传代后出现典型菌落。

可疑菌落需根据其菌落特征、染色后镜检、生化反应以及GFF, MIT等血清学方法进行鉴定。GIT是将浸有型特异血清的滤纸片置于接种有支原体的固体培养基上，经孵育后，若纸片周围的抑菌圈大于2 mm，则表示该支原体与所采用的血清同型。MIT是将支原体接种于含有抗血清和酚红的培养．基中，若抗体与支原体相应，则支原体的生长及代谢均受到抑制，不能分解葡萄糖产酸，酚红不变色。这两种方法特异性和敏感性高，可将支原体分成若干血清型。肺炎支原体分离培养的阳性率不高，且耗时长，故对临床快速诊断意义不大，但对流行病学调查有重要意义。

（五）血清学试验

肺炎支原体血清学检查包括非特异性抗体检测和特异性抗体检测。

1．非特异性抗体检测主要采用冷凝集素试验。冷凝集素是人感染肺炎支原体后产生的一种IgM型自身抗体，4℃条件下可凝集人的O型红细胞，约50％的患者于发病1周末或2周初呈阳性反应（抗体效价不小于1：64)。因该抗体也可见于流感或腺病毒感染、溶血性贫血、传染性单核细胞增多症等，少数健康者也可呈阳性反应，故渐被特异性抗体检测方法所取代。

2．特异性抗体检测主要有ELISA、间接荧光免疫法、明胶颗粒凝集法、补体结合试验等检测肺炎支原体IgM或IgG抗体。ELISA法快速、经济、敏感、特异性高，采用相对分子质量为170000的P1蛋白和相对分子质量为43000的多肽检测相应抗体，是目前诊断肺炎支原体感染最常用的血清学方法。