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沙眼衣原体(C.trachomatis)可引起人类沙眼、泌尿生殖道感染、性病淋巴肉芽肿及其他器官疾病。根据其致病性及部分生物学特性的差异,沙眼衣原体又分为三种生物变种,即沙眼生物变种(biovar trachoma )、性病淋巴肉芽肿生物变种(biovar lymphogranulomavenereum, LGV)和鼠生物变种((biovar mouse)。沙眼生物变种有15个血清型,LGV有4个血清型,鼠生物变种只有1个血清型。
一、生物学特性
(一)形态结构
电镜下检查可见原体呈球形或类球形,胞浆膜外有坚韧而致密细胞壁,具有高度感染性。原体用Giemsa染色为红色,与蓝色的宿主细胞质形成鲜明对比。始体的体积较大,形状不规则,始体用Giemsa染色呈蓝色。沙眼衣原体对革兰染色虽然一般反应为阴性,但变化不恒定。沙眼包涵体在上皮细胞的细胞质内很致密,Giemsa染色呈深紫色,由密集的颗粒组成,其基质内含有糖原,以碘液染色呈棕褐色斑块。
(二)培养特性
衣原体专性活细胞内寄生,绝大多数能在6~8日龄鸡胚卵黄囊中生长。1955年我国学者汤飞凡等采用鸡胚卵黄囊接种法首次成功分离培养出了沙眼衣原体,目前多采用细胞培养法培养衣原体,常用的细胞株有McCoy, Hela-299等。在培养基中加入代谢抑制剂如细胞松弛素B、放线菌酮、二乙氨乙基葡聚糖等,可提高分离培养的阳性率。也可采用离心或X射线照射细胞等方法,使更多的衣原体吸附到易感细胞表面。
(三)杭原与分型
沙眼衣原体的抗原成分复杂,有属、种、型等特异性抗原。
1.属特异性抗原衣原体细胞壁的ITS是主要的属特异性抗原,但缺乏O-多糖和部分核心多糖,也无典型内毒素的生物学活性,故与革兰阴性菌的ITS有所不同。
2.种特异性抗原位于主要外膜蛋白(major outer membrane protein, MOMP)上,可采用补体结合试验及中和试验检测该抗原。
3.型特异性抗原也位于MOMP上,采用单克隆抗体微量免疫荧光法可将沙眼衣原体分为19个血清型,其中沙眼生物变种有A,B,Ba,C,D,Da,E~1,1a,J,Ja和K共15个血清型,性病淋巴肉芽肿生物变种有L1,12,L2a和L3共4个血清型。
(四)基因组
沙眼生物变种D/UW-3/CX株的染色体是由1042519 bp组成的环状DNA。
(五)抵杭力
对热和常用消毒剂的抵抗力较弱,耐低温与干燥。对利福平、红霉素、四环素、多西环素或青霉素敏感。
二、临床意义
沙眼生物变种和LGV的自然宿主都是人,可致人眼、泌尿生殖道、呼吸道及淋巴结感染。鼠生物变种通常不引起人类疾病。
(一)沙眼生物亚种
1.沙眼由A,B,Ba和C血清型引起的一种慢性传染性结膜角膜炎,主要通过眼一眼或眼一手一眼途径直接或间接接触传播。沙眼衣原体侵袭眼结膜上皮细胞并在其中繁殖,在胞质内可形成多种形态的包涵体。沙眼早期症状表现为流泪、豁液脓性分泌物、结膜充血和滤泡增生。晚期出现结膜瘢痕、眼睑内翻、倒睫、角膜血管翳引起的角膜损害,可影响视力甚至造成失明。
2.包涵体结膜炎由B,Ba,D,Da,E,F,G,H,1,la,J,K等血清型引起。婴儿经产道感染,引起急性化脓性结膜炎(又称包涵体脓漏眼),成人经眼一手一眼途径或接触污染的游泳池水而感染,引起滤泡性结膜炎。病变类似沙眼,但不发生角膜血管翳,也无结膜瘢痕的形成,通常数周或数月痊愈。
3.泌尿生殖道感染多由沙眼生物亚种D~K血清型引起,主要经性接触传播,是引起非淋菌性尿道炎的主要病原。男性患者通常为尿道炎,未经治疗者多转为慢性,常周期性加重,或合并附睾炎、前列腺炎等。女性患者为尿道炎、宫颈炎、阴道炎、盆腔炎等,孕妇感染后可引起胎儿或新生儿的感染。衣原体常与淋病奈瑟菌混合感染。
4.沙眼衣原体肺炎主要由沙眼生物亚种D~K血清型引起,多见于婴儿。
(二)性病淋巴肉芽肿亚种
1.性病淋巴肉芽肿 由LGV的L血清型引起,经性接触传播。主要侵犯淋巴组织,女性可累及会阴、肛门、直肠以及盆腔淋巴结,男性常累及腹股沟淋巴结,发生化脓性炎症和慢性肉芽肿,也可形成瘘。
2.眼结膜炎 少见,但通常伴有耳前、领下以及颈部的淋巴结肿大。
三、微生物学检验
(一)检验程序
沙眼衣原体的检验程序见图26-2。
图26-2沙眼衣原体的检验程序
(二)标本采集
对于沙眼及包涵体结膜炎患者,可取眼结膜或眼穹窿分泌物涂片,或取眼结膜刮片;泌尿生殖道感染者可取泌尿生殖道拭子或宫颈刮片;性病淋巴肉芽肿患者可采集淋巴结脓液、生殖道上皮细胞刮片、直肠拭子或活检材料送检。
(三)标本直接检查
直接检查法快速、简便,但特异性较低,且可能出现假阳性反应,因此,在诊断性传播疾病时应特别慎重。检查时需设.立阳性和阴性对照。
1.显微镜检查常采用Giemsa染色、荧光抗体染色或碘液染色,镜下检查黏膜上皮细胞内是否存在包涵体,查到包涵体具有诊断参考价值。
2.酶免疫检测可检查临床标本中衣原体的可溶性抗原,并适用于同时检测大量标本。采用单克隆抗体或多克隆抗体酶免疫检测沙眼衣原体的脂多糖抗原。
3.核酸检测采用核酸探针、PCR技术,可提高检测的敏感性和特异性。
(四)分离培养与鉴定
将标本接种于鸡胚卵黄囊或传代细胞,分离沙眼衣原体多采用McCoy细胞。标本在培养前需研磨或破碎上皮细胞以释放出衣原体,组织标本采用含抗生素的稀释液将其制成浓度为10%~20%的悬液。检查分离培养物细胞内的包涵体可初步鉴定沙眼衣原体,进一步的鉴定可采用补体结合试验、免疫荧光试验或基因分析等技术。
(五)血清学试验
血清学试验主要有补体结合试验(CF)、微量免疫荧光试验(MIF)和酶免疫分析(EIA)等。由于不易获得衣原体感染急性期和恢复期的双份血清,且沙眼衣原体多为慢性或重复感染,所以,血清学方法在临床常规诊断中的价值不大。
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