病毒的免疫学检测包括不同感染部位标本中特异性抗原的检测以及血清特异性抗体的检测。

一、病毒抗原的检侧

1．免疫荧光（immunofluorescence,IF）技术IF技术可用于细胞培养病毒的鉴定，也适用于检测临床标本中的病毒抗原，具有快速、特异的优点。直接免疫荧光技术是用荧光素直接标记特异性抗体检测病毒抗原；间接免疫荧光技术是先用特异性抗体与标本中抗原结合，再用荧光素标记二抗与特异性抗体结合，从而间接识别抗原。近年来使用单克隆抗体（monoclonal antibody, McAb)，大大提高了检测的灵敏度和准确性。

2．免疫酶法（immunoenzyme assay, IEA）其原理与应用范围同免疫荧光技术，IEA是用酶（通常是辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶）取代荧光素标记抗体，酶催化底物形成有色产物，在普通光学显微镜下清晰可见，不需荧光显微镜，便于推广使用。

3．放射免疫测定法（radioimmunoassay, RIA)RIA分为竞争RIA和固相RIA两种方法。竞争RIA是用同位素标记的已知抗原与标本中未标记的待检抗原竞争性结合特异性抗体的试验，将形成的复合物分离出来，用放射免疫检测仪测定其放射活性，同时与系列稀释的标准抗原测定结果进行比较，确定出待检抗原的浓度；固相RIA是用特异性抗体包被于固相载体以捕获标本中的抗原，然后加入放射性标记的特异性抗体与抗原结合，测定其放射活性，得知抗原的量。RIA是最敏感的方法，其缺点在于操作烦琐、费时，且有放射污染性，不易于广泛开展。

4.酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA）先将特异性抗体包被（吸附）到塑料微孔板中以捕捉标本中相应抗原，然后加入酶标特异性抗体，相应抗原被夹在抗体之间，当加入酶的底物后显色，显色程度直接反映了标本中病毒抗原的量。因其敏感性接近RIA，又不接触放射性物质，现已被广泛应用于临床。

此外，必要时也可以用蛋白质印迹试验（western blot, WB）检测标本中的病毒抗原。

二、特异性抗体的检测

病毒感染后通常诱发机体针对病毒一种或多种抗原的免疫应答，特异性抗体效价升高或IgM抗体出现有辅助临床诊断的价值。

1．补体结合试验(complement fixation test, CFT)CFT分两个阶段：①抗原与抗体（一个为已知，一个为待检）混合，加入一定量的补体，若抗原与抗体相对应，则补体被消耗；②在上述混合物中加入溶血素致敏的绵羊红细胞，若补体已与抗原抗体复合物完全结合，则没有剩余补体存在，那么绵羊红细胞就不会溶血，结果为阳性，说明待检标本中有特异性抗体（或抗原）存在，出现阳性结果时血清标本最高稀释度为抗体的效价。由于补体结合抗体产生早、消失快，适用于诊断病毒近期感染。

2．中和试验(neutralization test, NT)在活体或活细胞内测定病毒被特异性抗体中和而失去致病力的试验称为NT。实验方法：①先测出病毒的半数致死量（LD₅₀）或半数感染量（ID₅₀) ;②随即取活病毒与被试血清按不同比例混合，放置1～2 h让其充分结合；③将病毒与血清混合液注入各组动物、鸡胚或组织细胞培养管／瓶内培养；④根据动物、鸡胚死亡数或细胞病变的管／瓶数，计算出百分比（％），然后再计算这些试验对象中的半数免于死亡或免于致病所需要的最少量血清（或最大量的病毒），就是该血清的中和抗体效价（称为50％终点的中和效价）。诊断病毒性疾病时，须取患者双份血清同时做对比试验，病后血清的中和抗体效价也必须超过病初血清4倍或4倍以上才能确诊。用此法鉴定病毒时，须将病毒分别与免疫血清及正常血清（对照）混合做对比试验，免疫血清比正常血清多中和50～100倍剂量的病毒，才能断定是该病毒。

病毒中和抗体的特异性高，持续时间久，显性或隐性感染后，血中可长期存在中和抗体，所以适用于流行病学调查或人群免疫水平研究，但因试验方法繁杂，耗用动物、鸡胚或细胞培养较多，故一般不作常规使用。

3．血凝抑制试验(hemagglutination inhibition test, HIT）某些病毒如流感病毒、副流感病毒、腮腺炎病毒、乙型脑炎病毒等能凝集红细胞，而抗体与这些病毒结合后能阻止其凝集，若双份血清抗体效价升高大于或等于4倍时，可诊断为这类病毒感染。本法简便、快速、经济、特异性高，常用于流行病学调查等。

4. IgM捕捉ELISA特异性IgM出现于病毒感染的早期或病毒感染的活动期，因此，从急性期患者单份血清中检出特异性IgM，作为实验室早期诊断病毒感染的可靠方法。实验中先用抗拜链血清包被微孔板，用以捕捉血清标本中的IgM类抗体，再加入特异性病毒抗原及酶标抗体以证实特异性IgM的存在。在先天性感染中，IgM检测有特殊意义，因IgM不能通过胎盘，新生儿血清中如发现抗病毒IgM则提示为宫内感染。

5．免疫印迹试验(WB )对于某些病毒感染的诊断需慎重，如HIV感染，在初筛阳性后，尚需用WB法进行确认试验，先将提纯的HIV病毒裂解后经SDS-PAGE，病毒蛋白质按其相对分子质量大小分开，再电转印至硝酸纤维素膜上制成膜条。然后将待检患者血清与带有HIV蛋白的膜条反应，若血清中含有抗HIV抗体则可与膜条上相应的HIV蛋白质条带结合，即可确证。