小RNA病毒科（Picornaviridae）是一类个体微小、无包膜的单链RNA病毒，主要包括鼻病毒属（Rhinovirus)、肠道病毒属（Enterovirus）及肝病毒属（Hepatovirus）等。甲型肝炎病毒（hepatitis A virus,HAV）属于小RNA病毒科，肝病毒属，是该病毒属唯一的一个成员。

一、生物学特性

1．形态结构HAV为直径27～32 nm、无包膜、衣壳蛋白呈二十面体立体对称的RNA病毒。1973年Feinstone等人在患者的粪便滤液中通过电子显微镜观察发现了HAV。病毒粒子组成包括30％的核糖核酸及70％病毒蛋白。

2．理化特性 HAV完整病毒颗粒在氯化铯溶液中的浮力密度为1.32～1.34 g/cm³,在中性蔗糖溶液中的沉降系数为150～160 S。感染早期，粪便中空心衣壳病毒颗粒的浮力密度为1.29～1.31 g/cm³，沉降系数主要为70 S。 HAV病毒颗粒耐酸、耐热，在pH值为3.0以下仍具有感染性，加热60℃30 min不能灭活病毒，通过电离辐射、苯酚及甲醛溶液处理易使病毒失活。

3．基因组结构 HAV基因组结构类似于其他小RNA病毒，为单正链RNA，长度约为7.5 kb，其组成为5'-NCR-P1-P2-P3-NCR-poly(A)-3',5'NCR全长由734～740个核苷酸组成，碱基序列高度保守，其中有内部核糖体进入位点（internal ribosomal entry site,IRES)，启始病毒的翻译。病毒特异性蛋白VPg（相对分子质量为25000)共价结合在5'末端。3'NCR全长由40～80,个核营酸组成，带有一个Poly(A)尾。其余基因组由带有三个不同区域（P1,P2,P3)的一个开放阅读框架组成，并编码一个相对分子质量约为250000的多聚蛋白质大分子（2225～2227个氨基酸），多聚蛋白经进一步水解剪切产生病毒的结构蛋白和非结构蛋白。P1区编码病毒结构蛋白，由1D,1B和1C区分别编码病毒三个主要衣壳蛋白VPl,VP2,VP3，由1A区编码的VP4衣壳蛋白对病毒粒子形成至关重要，但在成熟病毒颗粒中检测不到VPl与VP3衣壳蛋白在病毒表面形成单个抗原表位，可刺激机体产生中和抗体。P2区和P3区编码病毒非结构蛋白，P2区编码2A,2B和2C蛋白；2A蛋白功能不详；2B蛋白可能与病毒株对培养细胞的适应有一定的对应关系，2C蛋白可能具有解旋酶活性。P3区编码3A,3B,3C和3D蛋白，3A蛋白在病毒复制过程中可将3AB蛋白分子固定在浆膜上；313蛋白又称VPg，发挥病毒基因复制起始的重要作用。3C蛋白是病毒特异性水解蛋白酶，参与HAV多聚蛋白质分子翻译后的切割加工，使之成为具有功能的结构蛋白和非结构蛋白。3D蛋白是病毒的复制酶，为RNA依赖的RNA聚合酶。

4．分型 HAV仅有一个血清型，感染者产生的抗-HAV对不同地理区域来源的病毒再感染均具有保护作用。依据HAV基因组VP1/P2A之间168 bp序列差异将HAV分为7个不同基因型（I～Ⅶ，其中基因型Ⅰ、Ⅱ,Ⅲ和Ⅶ型为感染人的HAV(hHAV)，以Ⅰ型和Ⅲ型最为普遍。中国hHAV株多为I型。Ⅳ型、V型和Ⅶ型为感染猿猴的HAV。

5.敏感动物与细胞 除人类以外，已经确定对HAV敏感的动物主要是黑猩猩、狨猴和猕猴；目前主要应用于病毒培养的细胞株有恒河猴胚肾细胞、人成纤维细胞和非洲绿猴肾细胞。野生型HAV在体外细胞培养增殖速度非常缓慢，一般没有细胞病变产生，但适应培养细胞株可引起细胞病变且繁殖速度加快。

二、临床意义

HAV由粪一口途径通过污染的水源和食物传播，HAV感染者每克粪便中含有109个病毒粒子，病毒的主要宿主是人类。HAV的流行主要在温带地区，具有明显的季节性，高峰发病期主要在秋末冬初。甲型肝炎呈全球分布，表现为散发或暴发流行。HAV感染呈自限性，平均潜伏期为28天（15～50天），大多数感染者无黄疽且无明显症状，一般在3个月以内自行恢复。典型的甲型肝炎患者常表现为发烧、心神不安、厌食、恶心、腹部不适，小便深黄，大便发白并出现黄疽，临床上一般不出现慢性肝炎和长期持续排毒者，但是15％～20％患者病情会持续6个月。暴发型肝炎较少见。其致死率小于1.5％。主要为儿童和老年人。1988年春季，上海曾发生因食毛蜡而暴发的甲型肝炎流行，患者达292301人，死亡47人。

HAV感染初期即可检测到抗-HAV IgM, 3个月开始下降，6个月已无法检测到；抗-HAV IgG在IgM型抗体出现后也随之出现在血液中，可持续数年，使机体具有终生免疫力。

三、微生物学检查

1．标本采集依据标准操作规程（SOP）进行血清采集、运送、处理和储存，这将有助于准确测定抗-HAV IgM和HAV总抗体水平。在4℃条件下可储存3周以上，-20℃和-70℃可保存6个月，也可收集唾液和胆汁用于抗体检测。检测粪便中HAV抗原，应在发病前2周或出现症状后数天内采集，少数情况如婴儿粪便排病毒的时间较长。

2．检验方法

(1)抗体检测：①抗-HAV IgM测定：急性甲型肝炎临床诊断的最佳方法。采用固相抗体捕获免疫测定法，在固相表面包被抗人IgM，加入待检血清，随之被血清中IgM捕获并与之结合，再加入HAV病毒抗原也与IgM结合，最后加入标记的抗-HAV IgG结合于HAV病毒抗原上，通过底物显色进行测定。同时设置阳性和阴性对照。在症状出现时，几乎所有的甲型肝炎患者抗-HAV IgM均为阳性。感染6个月后，IgM变为阴性。②抗-HAV IgG或抗-HAV总抗体测定。采集发病早期和恢复期患者血清，用ELISA法或其他商用试剂盒检测血清中抗-HAV IgG或抗-HAV总抗体，可以了解患者是过去还是新近感染了HAV。

(2)抗原检测：血液中HAV抗原检测非常困难，现在采用RIA或EIA主要检测粪便、细胞培养物中病毒抗原。

(3)核酸检测；RT-PCR扩增HAV RNA是目前最敏感和广泛使用检测HAV RNA的方法。提取血液或粪便标本中HAV RNA，将其逆转录成cDNA，经PCR扩增其cDNA，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后进行溴化乙锭染色或经Southern杂交鉴定。采用RT-PCR定量检测HAV，优点是速度快、敏感、污染少，在甲型肝炎暴发期间能快速分析标本。

3．报告及解释抗-HAV IgM和HAV总抗体测定以及病毒核酸检测可以诊断甲型肝炎的急性感染或既往感染。血清抗-HAV IgM在甲肝症状出现时就可呈阳性，并可在急性期后期存在几个月。因此，抗-HAV IgM可用于近期HAV感染的诊断。抗HAV总抗体测定在急性甲肝期为阳性并可持续阳性，抗-HAV IgG阳性而IgM阴性表明既往HAV感染，并能保护其免受再感染。