1.高分子聚合物特性

图9-7显示高分子混合物经分离后分子质量对洗脱体积图。由图中可以看出示差折光检测器（RI)对大分子质量浓度低的物质较不敏感，而对低分子质量浓度高者较敏感。

图9-7分子质量对洗脱体积图

1-BSA:67 000，64 300±700，1％；2-溶解酵素，14 300，14 600±300，1％；3-缓激肽，1 060，1 090±10，2％；4-亮氨酸脑啡肽：556，592±6，3％

2.蛋白质及其聚合体

在各种工业应用中，测定蛋白质的绝对特性不仅严格而且必要，如在生化工程应用上，以蛋白质为基质的产品必须很纯而且无任何聚集态存在。而测定蛋白质的分子质量和是否有聚集态存在，光散射法是最理想的工具之一。

以往，在水相中用的低角度光散射测量法（LALLS）受到溶剂中不纯物质的干扰相当大。而MALLS的多角度测量大大降低了背景噪声的干扰，并能提供完整的信息和良好的重现性结果。图9-8显示蛋白质混合物的MALLS和RI的信号。样品在0.1mol/L, NaCl（含0.05mol/L的磷酸盐缓冲液）中进行实验，RI为Wyatt Optilab 903，流速为0.1moL/min，色谱柱为Shodex KW-803和KW-804。虽然此样品为标准样品，但MALLS仍很清楚地检测到聚集现象，此现象在RI几乎无法辨认。

图9-8蛋白质洗脱体积及聚集体信号图

细实线代表MALLS信号；细虚线代表RI信号；短粗线段表示经过计算后的摩尔质量

3.分枝

高分子聚合物的分枝程度和分布是影响其物理性质和化学性质的一个重要因素。采用多角度激光光散射系统（MALLS)与GPC系统联用是唯一决定分枝系数gm的方法。虽然也有其他一些确定分枝的方法，但是都不够直接且需要众多假设及虚拟因子。

由传统的RI或Viscometer(黏度检测器）测定的高支化分子的分子质量与绝对值有很大差别，若要做有效的色谱柱校正，则需以一系列与待测物成分相同的标准品做校正。若标准样品与待测物的成分或组分不同，则会产生很大的误差。例如，分子质量相同的球形高分子的洗脱时间比无规则线团状分子要长。

图9-9为由MALLS测得的聚苯乙烯（PS)支化和线形分子的均方旋转半径-相对分子质量对照图。可看出，虽然其相对分子质量相同，但分布明显不同。图9-10为rg对相对分子质量作图，从图中可以看出，藻酸钠（sodium alginate）样品在经过辐射处理后，其分子构型发生了明显的变化（藻酸钠样品辐射后均方旋转半径对相对分子质量的斜率明显变大，由0.333增加至0.883，表明其构型由球状转化为卷曲的线状)。

图9-9PS线形与支化分子的对照图

4.动力学／反应速率

使用MALLS，可研究抗原-抗体反应，反应发生时就可决定聚集粒子的大小。当改变温度、浓度或催化剂时，MALLS可记录下反应发生时分子的特殊变化。

使用DAWN检测器研究浓度对分子质量为75kDa的单分子蛋白质聚集作用的影响。图9-11描述了这种特殊蛋白质在1mg/mL范围内得到的浓度相关性。如图所示，该蛋白质在低浓度为单一分子，而在浓度大于700ug/mL时聚集为六聚体。该结果与由戊二醛高度交联技术所得结果完全相符。

图9-10均方旋转半径对相对分子质量图（分子构型图）

图9-11浓度变化对蛋白质聚集的影响

5.低分子质量的测定

DAWN HELEOS或mini DAWN TREOS的固定光电二极管检测器可以捕捉到很微弱的光散射信号，使得分子质量的测定成为可能。使用DAWN系列标准配置的任何一款激光器，都可以轻易地测量分子质量低于2000Da的聚合物，并具有相当的准确性。

由于DAWN HELEOS或mini DAWN TREOS具有三个以上的多角度同时捕捉散射信号的能力，即使极微弱的信号，如只比背景值略高的低分子质量样品所散射出的信号也可以从不同的角度去捕捉，累计在一起就可以计算出准确的结果。这是单角度或者两角度检测器所无法做到的。