已发表的植物组织培养的培养基配方很多，但被广泛采用的培养基并不太多，许多培养基是由这些被广泛采用的基础培养基经改良而发展起来的。

(一)培养基的改良

在建立一个新的实验体系时，为了能研制出一种适合的培养基，最好先由一种已被广泛采用的基本培养基(如MS或B₅)开始。当通过一系列实验，对这种基本培养基做某些定性和定量的小变动之后，即有可能得到一种能满足实验需要的新培养基。在改动一种培养基时，无机成分和有机成分应当分别处理。

在植物组织培养基中最需改动的因子是生长调节物质，尤其是生长素和细胞分裂素。开始时，可以选择一种基本培养基，用不同浓度的激素进行比较试验，获得最适的激素浓度。例如，用5种不同浓度(0umol/L,0.5umol/L,2.5umo1/L, 5umol/L, 10umol/L)的某种生长素(如NAA)和某种细胞分裂素(如BAP)，这两种激素5种浓度的所有可能组合，即构成了一个具有25项处理的实验。由这25项处理中选出最好的一个，然后在保持浓度不变的情况下，再试验其他种类的生长素和细胞分裂素。当改变细胞分裂素的种类时，保持生长素不变，反之亦然。另外，虽然高浓度盐分培养基对若干实验体系都已证明效果很好，但有些培养物在低浓度盐分培养基上生长得更好。因此就还有必要试验一下在保持生长调节物质最佳组合不变的情况下，1/2和1/4水平的基本培养基盐分的效果。最后，还要进行一系列的实验以确定适合的蔗糖浓度。通过以上这些实验，常常就足以研制出一种适合的培养基。不过，为了对这种培养基做进一步的改良还有很多其他可能性值得探讨。

为了能给一个新的实验体系选出一种适合的培养基，De Fosard等(1974)介绍了一种“广谱实验法”。与上面介绍的方法相比，这个方法是比较复杂的。然而，如果利用简单的方法解决不了问题，就有必要用这个方法试验一下。在这个广谱实验法中，把培养基中的所有组分分为4大类：无机盐、生长素、细胞分裂素、有机营养物质(蔗糖、氨基酸和肌醇等)。对每一类物质再选定3个浓度，即低(L)、中(M)和高(H)。4类物质各3种浓度的各类不同组合即构成了一项包括81个处理的实验。在这81个处理中最好的一个可用4个字母表示。例如，一个包含中等浓度无机盐、低浓度生长素、中等浓度细胞分裂素和高浓度有机营养物质的处理即可表示为MLMH。达到这个阶段以后，即可再试验不同类型的生长素和细胞分裂素，以找到它们的最好类型。注意，有些实验系统对生长素和细胞分裂素这两类生长物质的具体形式非常敏感。

(二)培养基的制备

现在配制培养基最简单的方法是用市售培养基干粉，其中含有无机盐、维生素和氨基酸。把这种干粉溶解在蒸馏水里(要比培养基的最终容积少10％)，加上蔗糖、琼脂和其他必要的补加物，最后再加入蒸馏水使之达到最终的容积。调节pH，高压灭菌，就可制成所需要的培养基。在国外有厂家制作和销售这种于粉培养基，我国市场上也有供应。

配制培养基的方法有两种：一种是按照配方规定的数量分别称量出各种成分，分别使它们溶解于水，然后再将它们混合在一起；另一种是先配制一系列的浓缩储备液(母液)，如大量元素(浓缩20倍)、微量元素(浓缩200倍)、铁盐(浓缩200倍)和蔗糖之外的有机物质(浓缩200倍)等，再取一定量的各种浓缩液配制培养基。在制备这4种储备液时，应使每种成分分别完全溶解，然后再把它们彼此混合。各种生长调节物质的配备液应分别配制，如果它们是不溶于水的，则应先把它们溶解在很少量的适当溶剂中，然后再加蒸馏水到最终容积。激素必须单独配制成浓缩液，浓缩强度取决于所要求的生长调节物质的水平。所有的储备液都应储存于适当的塑料瓶或玻璃瓶中，置冰箱中保存。铁盐储备液必须储存于棕色玻璃瓶中。在储备椰子汁(液体胚乳)时，要先把由果实中采集到的汁液加热、煮沸、过滤其中的蛋白质，然后置于塑料瓶中储存于-20℃的低温冰箱内。使用这些储备液之前必须轻轻摇动瓶子，如果发现其中有沉淀悬浮物或微生物污染，必须立即将其淘汰。

在制备储备液和培养基的时候，应当使用蒸馏水或无离子水，以及高纯度的化学试剂。

培养基配制的步骤如下所述。

(1)称量出规定数量的琼脂和蔗糖，加水直到培养基最终容积的3/4，在恒温水浴中加热使之溶解。在配制液体培养基时则无需加热，因为蔗糖甚至在微温的水中也可以溶解。

(2)分别按配方逐个加入各种储备液，包括生长调节物质和其他的特殊补加物。如果由于特殊原因有必要在高压灭菌之后再加入维生素和生长素，那么在调节了pH之后，可使这些物质的溶液通过孔径为0.22～0.45um的微孔滤膜滤器消毒。

(3)加蒸馏水直至培养基的最终容积。

(4)充分混合后，用0.1mol/L NaOH和0.1mol/L HCl调节培养基的pH。一般来说，植物组织培养适合的pH为5.8。当pH高于6时，培养基将会变硬。低于5时，琼脂就不能很好地凝固。

(5)把培养基分装到所选用的培养容器中，每个25mm×150mm的试管约装培养基15mL；每个150mL三角瓶约装50mL。

如果在步骤(2)～(5)期间培养基开始凝固，应将装培养基的三角瓶置水浴中加热，只有当培养基为均匀的液态时才能分装。

(6)包在纱布中的棉塞(它能阻止微生物污染，但可使气体自由交换)，或其他适宜的塞或盖封严瓶口。

(7)把已装入了培养基的培养容器装在铁丝篮子里，外面包上一层铝箔以防止棉塞在高压灭菌时吸湿，在120℃(1.06kg/cm²)下灭菌20min。如果所用的是已经灭过菌的不耐高温的塑料培养容器，培养基可装在250mL或500mL的三角瓶中，以铝箔或牛皮纸封住瓶口，进行高压灭菌(也可用1000mL三角瓶，只是大三角瓶在分装时不太方便)。灭菌后使培养基冷却到大约60℃，然后在无菌条件下将其分装到塑料容器中。

(8)对不能用高压灭菌的药品来讲，经过滤灭菌后的药液等到高压灭菌的培养基冷却到大约60℃时，将其在超净工作台加入到培养基中，摇匀。可用恒温水溶，以免培养基温度下降过快而凝固。

(9)使培养基在室温下冷却，置冰箱中在4℃下保存。当用试管制备琼脂固化培养基时，根据试验目的把培养基做成斜面，可为组织的生长提供一个较大的表面积。

注意，为了尽量减少人为误差，必须严格按上列各个步骤进行操作。应当把培养基中的各种成分都写在纸上，加进去一个即划掉一个。所有装着培养基的试管、玻璃罐、玻璃瓶和培养皿等都应当清楚地做上标记。