细菌能在各种不同的自然环境中生长。地表水、地下水，甚至雨水和雪水都含有多种细菌。当水体受到人畜粪便、生活污水或某些工农业废水污染时，细菌大量增加。因此，水的细菌学检验，特别是肠道细菌的检验，在卫生学上具有重要的意义。但是，直接检验水中各种病原菌，方法较复杂，有的难度大，且结果也不能保证绝对安全。所以，在实际工作中，经常以检验细菌总数，特别是检验作为粪便污染的指示细菌，如总大肠菌群、粪大肠菌群、粪链球菌、肠道病毒等，来间接判断水的卫生学质量。

1．水样采集

采集细菌学检验用水样，必须严格按照无菌操作要求进行；防止在运输过程中被污染，并应迅速进行检验。一般从采样到检验不宜超过2h；在10℃以下冷藏保存不得超过6 h。

采集江、河、湖、库等水样，可将采样瓶沉入水面下10～15cm处，瓶口朝水流上游方向，使水样灌入瓶内。需要采集一定深度的水样时，用采水器采集。采集自来水样，首先用酒精灯灼烧水龙头灭菌或用体积分数为70％的酒精消毒，然后放水3 min，再采集约为采样瓶容积的80％左右的水量。

2．细菌总数的测定

细菌总数是指1 mL水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24 h培养后，所生长的细菌菌落(CFU)的总数，它是判断饮用水、水源水、地表水等污染程度的标志。我国《生活饮用水卫生标准》(GB 5749-2006)中规定，每毫升生活饮用水
中细菌总数不得超过100个。其主要测定程序如下：

(1)对所用器皿、培养基等按照方法要求进行灭菌。

(2)以无菌操作方法用1 mL灭菌吸管吸取混合均匀的水样(或稀释水样)注入灭菌平皿中，倾注约15mL已熔化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并旋摇平皿使其混合均匀。每个水样应做两份，还应另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作空白对照。待营养琼脂培养基冷却凝固后，翻转平皿，置于37℃恒温箱内培养24 h，然后进行菌落计数。

(3)用肉眼或借助放大镜观察，对平皿中的菌落进行计数，求出1 mL水样中的平均菌落数。报告菌落计数时，若菌落数在100以内，按实测数字报告；若大于100，采用两位有效数字，用10的指数来表示。例如：菌落数为37750个/mL,记作3.8×10⁴个/mL。

3．总大肠菌群的测定

粪便中存在大量的大肠菌群细菌，其在水体中存活时间和对氯的抵抗力等与肠道致病菌(如沙门氏菌、志贺氏菌等)相似，因此，将总大肠菌群作为粪便污染的指示细菌是合适的。但在某些水质条件下，大肠菌群细菌在水中能自行
繁殖。

总大肠菌群是指那些能在35℃,48 h内使乳糖发酵产酸、产气、需氧及兼性厌氧的、革兰氏阴性的无芽抱杆菌，以每升水样中所含有的大肠菌群的数目表示。其测定方法有多管发酵法和滤膜法。多管发酵法适用于各种水样(包括底质)，但操作较烦琐，耗时较长。滤膜法操作简便、快速，但不适用于浑浊水样。具体测定方法在“环境微生物学”相关课程中已作介绍，在此不再重述。

4．其他粪便污染指示细菌的测定

粪大肠菌群是总大肠菌群的一部分，是指存在于温血动物肠道内的大肠菌群细菌，与测定总大肠菌群不同之处在于将培养温度提高到44.5℃，在该温度下仍能生长并使乳糖发酵产酸、产气的为粪大肠菌群。

沙门氏菌属是常常存在于污水中的病原微生物，也是引起水传播疾病的重要来源。由于其含量很低，测定时需先用滤膜法浓缩水样，然后进行培养和平板分离，最后，进行生物化学和血清学鉴定，确定一定体积水样中是否存在沙门氏菌。

链球菌(通称粪链球菌)也是粪便污染的指示细菌。这种菌进入水体后，在水中不再自行繁殖，这是它作为粪便污染指示细菌的优点。此外，由于人粪便中粪大肠菌群多于粪链球菌，而动物粪便中粪链球菌多于粪大肠菌群，因此，在水质检验时，根据粪大肠菌群与粪链球菌菌数的比值不同，可以推测粪便污染的来源。当该比值大于4时，则认为污染主要来自人粪；若该比值小于或等于0.7,则认为污染主要来自温血动物粪便；若该比值小于4而大于2，则为混合污染，但以人粪为主；若该比值小于或等于2，而大于或等于1，则难以判定污染来源。粪链球菌数的测定也采用多管发酵法或滤膜法。