4．有机溶剂沉淀

用和水互溶的有机溶剂使蛋白质沉淀的方法很早就用来纯化蛋白质。有机溶剂沉淀是指在蛋白质溶液中，加入与水互溶的有机溶剂，显著地减小蛋白质的溶解度而发生沉淀的现象。有机溶剂沉淀法常适用于蛋白质、酶、核酸、多糖等物质的提取。由于本法的机理和盐析法不同，可作为盐析法的补充。

有机溶剂沉淀是由于加入有机溶剂于蛋白质溶液中能产生多种效应，这些效应结合起来，使蛋白质发生沉淀。尤其是水的活度的降低，当有机溶剂浓度增大时，水对蛋白质分子表面上荷电基团或亲水基团的水化程度降低，或者说溶剂的介电常数降低，因而静电吸力增大；同时在憎水区域附近有序排列的水分子可以为有机溶剂所取代，使该区域在有机溶剂中的溶解度提高，发生聚集而沉淀。

一般来说，在低离子强度和等电点附近，沉淀易于生成，所需有机溶剂的量较少。蛋白质的分子量越大，有机溶剂沉淀越容易，所需加入的有机溶剂量也越少。与盐析法相比，有机溶剂密度较低，易于沉淀分离，沉淀产品不需脱盐处理。但该法和等电点沉淀一样容易引起蛋白质变性，必须在低温下进行。

例如，多糖类药物主要来源于动物、植物、微生物和海洋生物，可分为低聚糖、均多糖和杂多糖等j种。目前，动物来源的肝素、鲨鱼骨黏多糖、甲壳素、硫酸软骨素和透明质酸等杂多糖仍主要是从动物材料中提取、纯化获得，提取时主要采用碱解和酶解方法，而多糖纯化则可采用乙醇分级沉淀、季铵盐络合沉淀和离子交换层析等方法。

5．选择性热变性沉淀

在较高温度下，热稳定性差的蛋白质将发生变性沉淀，利用这一现象，可根据蛋白质问热稳定性的差别进行蛋白质的选择性热变性沉淀，来分离纯化热稳定性高的目标产物。

必须强调的是，选择性热变性沉淀是一种变性分离法，使用时需对目标产物和共存杂蛋白的热稳定性有充分的了解才可。

6．凝聚技术

凝聚是指在中性盐的作用下，由于双电层排斥电位的降低而使胶体体系不稳定的现象。胶粒保持分散状态的主要原因有：①由于带有相同的电荷和扩散双电层的结构。

②由于胶粒表面的水化作用，形成了包围于粒子周围的水化层，阻碍了胶粒问的直接聚集。但一旦∈电位降低，水化层也随之减弱。加入高价阳离子导致凝聚作用的原因是降低《电位和脱除了胶粒表面的水化膜，从而导致凝聚现象的发生。

7.絮凝技术

絮凝是指在某些水溶性高分子絮凝剂的存在下，基于架桥作用，使胶粒形成粗大的絮凝团的过程，是一种以物理集合为主的过程。其机理是通过静电引力、范德瓦尔斯力和氢键力的作用，使水溶性高分子聚合物强烈地吸附在胶粒表面，产生了架桥连接，生成粗大的絮团。

常用絮凝剂有聚丙烯酰胺衍生物、苯乙烯类衍生物及其无机高分子聚合物絮凝剂、天然有机高分子絮凝剂等。其中天然有机高分子絮凝剂主要有明胶、海藻酸钠、骨胶、壳聚糖等。

聚电解质对蛋白质的沉淀作用机理与絮凝作用类似，同时还兼有一些盐析和降低水化用，其缺点是易使蛋白质发生改变。

8．沉淀技术的组合应用

不管是盐析法、有机溶剂沉淀法、选择性变性沉淀法，还是等电点沉淀法，各种方法都有局限性。在实际应用时，多种沉淀方法相结合是一个发展方向。如前文所述的结合等电点沉淀和有机溶剂沉淀的方法制备酪蛋白就是很好的例子。