透明质酸钠是一种天然直链多糖，由（1→4）-β-D葡萄糖醛酸和（1→3）-2-乙酞氨基-β-D-葡萄糖结合而成的双糖结构单元所组成。根据透明质酸钠结构单元的特性，对其进行深加工后制成的医用透明质酸钠凝胶是一种无种属特异性、无毒、溶解性能好、生物相容性良好的新型生物材料，被广泛用于多种眼科手术，用于防治外伤性或退变性骨关节炎，还可用于普通外科、妇产科等腹、盆腔手术预防术后肠粘连和盆腔粘连，及肌健、关节和神经手术预防组织粘连。

医用透明质酸钠凝胶作为一种植人体内的医用生物材料必须严格控制各类杂质的含量，以确保产品使用的安全性和有效性。医用透明质酸钠凝胶在提纯和干燥生产工艺中需要使用的乙醇很难完全挥发掉，微量乙醇的存在将使产品在使用过程中对患者产生不同程度的刺激反应，通常可致疼痛，并影响关节活动及其它许多器官系统的功能，故应严格控制乙醇的残留量。笔者按YY0308–2004［1］要求，采用顶空气相色谱法测定了医用透明质酸钠凝胶中的乙醇残留量，依据JJFl059–1999［2］、CNAS–GL06［3］，对测量结果的不确定度进行了系统分析，找出影响的主要因素，并对各不确定度分量进行了评定和量化。

1实验部分

1.1主要仪器与试剂

气相色谱仪：PerkinElmerClarus680型，配有氢火焰离子化检测器（FID），美国PE公司；顶空自动进样器：PerkinElmerTurbomatrix40型，美国PE公司；20mL顶空瓶（带聚四氟乙烯薄膜胶塞密封垫）；电子天平：MettlerAB104型，瑞士梅特勒公司；乙醇纯度标准物质：99.8%，中国计量科学研究院；实验用水为纯化水。

1.2实验条件

1.2.1气相色谱分析条件

色谱柱：DB–1型（60m×0.32mm，0.5μm，美国安捷伦公司）；柱温：50℃，保持2min，以10℃／min的速率升至160℃，保持5min；分流比：1∶2；进样器、检测器温度：180℃。

1.2.2顶空分析条件

炉温：80℃；进样针温度：100℃；传输线温度：120℃；平衡时间：30min。

1.3实验方法

乙醇标准贮备溶液的配制：取外部干燥的100mL量瓶，加入约30mL水，精密称取乙醇纯度标准物质0.1g于该容量瓶中，加水至刻度，摇匀。此溶液浓度为1mg／mL。乙醇标准溶液的配制：用1.0，2.0，3.0，5.0mL的单标线吸量管分别吸取乙醇标准贮备液1.0，2.0，3.0，5.0mL于10mL容量瓶中，加水定容，配制成浓度为100，200，300，400，500μg／mL的系列标准溶液。样品制备：精密称取1.0g样品于20mL顶空瓶中，加入5.0mL水，压盖密封。分别将系列标准溶液与样品溶液置于顶空进样器上，按1.2实验条件进行测定，记录峰高，拟合标准曲线，并计算样品中乙醇的含量。

2数学模型

乙醇残留量测定结果按式(1)计算：

3测量不确定度来源

顶空气相色谱法测定医用透明质酸钠凝胶中乙醇残留量的不确定度主要来源：（1）乙醇纯度标准物质引入的不确定度;（2）称量引入的标准不确定度；

（3）标准溶液和样品溶液配制过程中引入的不确定度；色谱测定过程引入的不确定度。

4测量不确定度各分量的评定

4.1乙醇纯度标准物质引入的不确定度urel(c)

根据中国计量科学研究院提供的证书信息，乙醇纯度的标准值为99.8%，扩展不确定度为0.3%(k=2)，则乙醇纯度标准物质引入的标准不确定度为0.3%／2=1.5×10–3，相对标准不确定度：

4.2称量引入的标准不确定度

（1）标准品称量引入的不确定度：称取量为0.1040g，根据天平检定证书，其最大允许误差为±0.5mg，按矩形分布考虑，则标准品称量引入的相对不确定度：

（2）样品称量引入的不确定度：称取量为1.0000g，根据天平检定证书，其最大允许误差为±0.5mg，按矩形分布考虑，则标准品称量引入的相对不确定度为：

则称量引入的相对标准不确定度：

4.3溶液配制过程中引入的不确定度

（1）玻璃量器校准引入的不确定度：配制标准溶液和样品溶液所用的玻璃量器均有误差［4］，按三角分布考虑，k=6估算标准溶液和样品溶液配制过程使用的系列玻璃量器因校准引入的相对不确定度分量见表1。

（2）温度变化引入的不确定度：实验所用玻璃

量器已于20℃校准，水的膨胀系数为2.1×10–4／℃，假设实验时温度在±3℃之间波动，按矩形分布考虑，k=3，则体积变化引入的不确定度(mL)为(V×2.1×10–4×3)／3，结果见表1。由玻璃量器校准和温度变化引入的相对标准

不确定度urel(V)：

4.4色谱测定引入的不确定度

（1）标准曲线方程的建立：以系列标准溶液的浓度为横坐标，气相色谱法所测得的峰高值为纵坐标拟合标准曲线，并据此建立标准曲线方程（标准曲线拟合数据见表2）。

（2）标准曲线的标准偏差即测定值和拟合值之间残差的标准偏差s：

（4）重复测定和样品的不均匀性引入的不确定。采用同批样品平行取样测定6次，乙醇残留量为314.19，341.56，341.62，346.12，344.28，352.19μg／g，平均值为344.49μg／g，按A类不确定度评定，则相对标准不确定度urel(X)：

将上述两项不确定度分量合成色谱测定引入的相对标准不确定度：

5合成标准不确定度及扩展不确定度相对标准不确定汇总见表3。

（2）合成标准不确定度。由上述几项相对标准不确定度分量可求出合成相对标准不确定度：

（3）扩展不确定度。取包含因子k=2，则相对扩展不确定度：

样品的称量为m=1.0000g，样品稀释体积为5.0mL，从标准曲线方程计算得到测量样品（2次）中乙醇的浓度平均值为c0=68.82μg／mL,样品中乙醇的含量由(1)式计算得：

测量样品中乙醇含量的扩展不确定度医用透明质酸钠凝胶中乙醇含量的测定结果表示为(344.10±37.51)μg／g，k=2。

6结语

通过对医用透明质酸钠凝胶中乙醇残留量测量不确定度的评定，发现影响测量不确定度的主要因素是标准曲线拟合及重复测定和样品的不均匀性。因此在测试样品时应严格控制实验条件，按照规范操作，并把仪器调整至最佳状态，以保证测量结果的准确可靠。