农药残留快速测定仪的原理［1–2］：在一定条件下氨基甲酸酯和有机磷类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用并产生显色反应，其抑制率与农药的浓度呈正相关。用农药残留测定仪在波长412nm处测定吸光度的变化值计算抑制率，可以判断样品是否含有氨基甲酸酯和有机磷类农药及二者含量是否超标。GB／T5009.199–2003以抑制率大于或等于50%为阳性判断［1］，NY／T448–2001以抑制率大于或等于70%为阳性判断［2］。由于农药残留快速测定仪生产企业较多，各种仪器产品因发光光源、光路、结构等不同，每台仪器检测的灵敏度（测量下限）不一致，因此对仪器灵敏度的校准非常必要。

目前，我国尚未对农药残留快速测定仪制订统一的检定规程或校准规范，部分省市计量院参照分光光度计国家检定规程［3］制定了地方计量检定规程／规范［4–5］，仅仅对仪器的波长示值误差和吸光度示值误差进行检定／校准，没有对仪器的灵敏度进行校准，而酶抑制法测量农药残留因使用的酶、底物、显色剂有一定的特异性而影响测量结果［6］，仅对仪器的波长、吸光度进行评价是不够的，仪器灵敏度准确与否对农药残留是否超标的判断影响甚大。

1.农药残留快速测定仪灵敏度的校准

NY／T448–2001指出，含有农药的样品与酶发生反应，在410nm处有最大吸收峰，农药的抑制率按式(1)计算：

式中：ΔA0——对照溶液反应3min后的吸光度变化值；

ΔAt——样品溶液反应3min后的吸光度变化值。

农药残留快速测定仪灵敏度的校准方法是先将有证农药标准物质溶液进行逐级稀释，从低于检出限浓度开始由低向高配制出系列农药标准溶液，再把农药标准溶液加入到按照缓冲溶液、显色剂、底物、乙酰胆碱酯酶制备的试剂盒（或试管）中，按照国家标准GB／T5009.199–2003中条件从低到高逐个浓度进行测量，在测得抑制率为50%时，此浓度即为仪器的灵敏度。

按照国家标准GB／T5009.199–2003［1］酶抑制率法部分农药的检出限见表1。

2校准结果分析

影响农药残留快速测定仪灵敏度校准结果准确性的因素是多方面的，以下从标准物质、称量、溶液的配制、溶液稀释等方面进行分析。

2.1有证标准物质纯度引入的不确定度u1

我国现有农药标准物质有固体和液体两种，以GBW(E)060225呋喃丹农药纯度标准物质为例，其标准物质证书上给出的质量分数为99.8%，相对扩展不确定度为0.5%（k=2），则其相对标准不确定u1,rel=0.5%／k=0.25%。

2.2农药标准物质称量引入的不确定度u2

标准物质称量引入的标准不确定度u2主要来自天平校正产生的不确定度，按检定证书天平称量的变动性为±0.1mg，设为均匀分布，k3=，则u2=0.1／k=0.058mg，当称取标准物质5mg时，其相对标准不确定度u2,rel=(u2／5)×100%=1.2%。

2.3农药标准溶液配制、稀释引入的不确定度u3

100mL容量瓶最大允许误差为±0.2mL，设为均匀分布，k3=，则u31=0.1／k=0.12mL，相对标准不确定度u31,rel=(u31／100)×100%=0.12%。1000mL容量瓶的最大允许误差为±0.8mL，设为均匀分布，k3=，则u32=0.8／k＝0.48mL，相对标准不确定度u32,rel=(u32／1000)×100%=0.5%。2mL分度吸管的最大允许误差为±0.012mL，u33=0.012／k＝0.007mL，相对标准不确定度u33,rel=(u33／2)×100%=0.4%。容量瓶使用温度与校准温度不同引起的容量差别和液体体积重复性变化所引入的不确定度对测定结果影响较小，在此忽略不计，则：

2.4对照溶液配制用玻璃量器引入的不确定度u4

1000mL容量瓶最大允许误差为±0.8mL，按均匀分布，k3=，则u41=0.8／k=0.48mL，相对标准不确定度u41,rel=(u41／1000)×100%=0.5%。10mL分度吸管最大允许误差为±0.05mL，u42=0.05／k＝0.03mL，相对标准不确定度u42,rel=(0.03／10)×100%=0.3%。则：

2.5对照溶液配制称量引入的不确定度u5

按照GB／T5009.199–2003要求，需分别称量11.9g无水磷酸氢二钾、3.2g磷酸二氢钾、160mg二硫代二硝基苯甲酸，因称量质量大，天平变动性引入的不确定度较小，可以忽略。参照2.2，称量15.6mg碳酸氢钠、25.0mg硫代乙酰胆碱引起的相对标准不确定度分别为：u51,rel=(0.058／15.6)×100%=0.4%，u52,rel=(0.058／25.0)×100%=0.2%。

2.6反应耗时计时引入的不确定度u6

秒表的检定证书给出一等秒表的最大允许误差为±0.6s，按均匀分布，k3=，反应耗时约3min，则计时3min引入的标准不确定度u6=0.6／k＝0.4s，相对不确定度u6,rel=(u6／180)×100%=0.2%。

2.7合成相对标准不确定度

u1～u6各量彼此独立，互不相关，故合成相对标准不确定度：

取k=2，相对扩展不确定度U=kuc,rel=4%。

3结语

对农药残留快速测定仪灵敏度进行校准，可以科学、客观地评价仪器计量性能，为用户提供技术参考，满足社会需求。