罗丹明B又称玫瑰红B、蕊香红B、玫瑰精B和若丹明B，是一种具有鲜桃红色的人工合成碱性荧光染料，主要用于打字纸、有光纸等造纸工业，油漆、图画等颜料制造，也可用于腈纶、麻、蚕丝等织物以及麦秆、皮革制品的染色。罗丹明B进入人体后易导致人体皮下组织增生肉瘤，具有致癌和致突变性［1－3］。我国于2008年明确规定不允许将罗丹明B用作食品添加剂及食品染色［4］，欧盟等国家不允许在食品中使用罗丹明B。但由于罗丹明B价格低廉、着色稳定、色泽鲜艳等特点，将其添加到食品中的非法事件仍时有发生，严重危害人们的饮食安全。罗丹明B的检测方法有固相萃取–高效液相色谱法［5］、液相质谱联用法［6–7］，及2010年国家质量监督检验检疫总局发布的行业标准SN／T2430–2010［8］。以上方法样品处理过程复杂，难以满足日常快速、简便的检测要求，不易推广应用。笔者以干红辣椒为研究对象，采用甲醇水溶液（体积80∶20）超声提取辣椒中的罗丹明B，稀释、离心、过0.22μm滤膜过滤后，进行液相色谱（荧光检测器）测定，对罗丹明B进行了定性和定量分析。该方法样品前处理简单、罗丹明B的色谱峰形好、分离度高、线性范围宽，定量结果具有很好的重现性、精密度，罗丹明B回收率高，可以满足辣椒样品分析要求。

1实验部分

1．1主要仪器与试剂

液相色谱仪：L–2000型，配荧光检测器（FLD），日本日立高新技术公司；旋涡混匀器：XW–80A型，上海精科实业有限公司；高速离心机：TG16–WS型，湖南赛特湘仪离心机仪器有限公司；

超声波仪：SK1200H型，上海科导超声仪器有限公司；甲醇：色谱纯；罗丹明B标准样品：纯度不低于98%；罗丹明B标准储备溶液：200μg／mL，准确称取适量罗丹明B标准样品，用甲醇水溶液（体积比80∶20）溶解完全并稀释定容。

1．2色谱条件

色谱柱：LaChromC18柱（250mm×4.6mm）；柱温：35℃；流动相：甲醇–水溶液（体积比70∶30）；流速：1.0mL／min；荧光检测器：激发波长550nm，发射波长580nm；进样量：20μL。

1．3样品处理

准确称取2.000g粉碎处理好的辣椒样品于50mL的具塞玻璃比色管中，加入25mL甲醇–水溶液（体积比80∶20），漩涡混合2min，超声提取60min后用超纯水定容至50mL，混匀后以10000r／min离心5min。取上清液过0.22μm滤膜过滤后用液相色谱法进行测定。

1．4样品测定

将20μL样品溶液和罗丹明B标准溶液依次用液相色谱仪按1.2色谱条件进行测定，以保留时间定性，以色谱峰面积定量。

2结果与讨论

2．1样品提取条件选择

罗丹明B是酸碱两性化合物，易溶于水、甲醇、乙腈等。其甲醇溶液呈现玫瑰红色，有强烈的荧光，参考文献［9］，采用甲醇–水溶液（体积比80∶20）进行提取。

超声提取是最简单快捷的提取方法，回收率高，所需要时间短，溶剂量少，因此采用超声提取法。超声提取后直接用离心的方式对提取液进行初步净化处理，与普通的过滤方法相比减少了待测组分的损失，提高了回收率。

2．2流动相的选择

采用甲醇－水溶液作为流动相，对80∶20，75∶25，70∶30三种配比的甲醇－水体系进行试验，罗丹明B的色谱保留时间分别为6.747，8.453，11.893min，色谱峰形均尖锐对称，无拖尾、无干扰峰。当甲醇－水的体积比为80∶20和75∶25时，罗丹明B色谱峰与辣椒样品基体成分色谱峰的分离度不高，存在干扰峰；甲醇－水的体积比为70∶30时，罗丹明B色谱峰附近无干扰峰，峰与峰之间的分离度最好，适合于罗丹明B的定性和定量。故实验采用甲醇－水溶液（体积比70∶30）作为流动相。

图1是在1.2色谱条件下加标辣椒样品的液相色谱图。从图1中可以看出，该条件下罗丹明B色谱峰峰形良好，与辣椒基体成分色谱峰基线分离，易定性、定量。

2．3线性方程及检出限

用罗丹明B标准储备溶液逐级稀释配制成质量浓度为4.0，10.0，20.0，40.0，100.0ng／mL罗丹明B标准系列溶液，对每个浓度水平分别测定，以色谱峰谱峰面积（Y）为纵坐标、罗丹明B溶液的质量浓度（X）为横坐标进行线性回归。结果显示，色谱峰面积与罗丹明B溶液的质量浓度在0～100ng／mL范围内呈现良好的线性关系，线性方程为Y=60450X–4912，相关系数r=0.9997。

随试样同时做空白试验，对空白样平行测定10次，计算空白值的标准偏差，以3倍空白值的标准偏差除以方法校准曲线的斜率，得方法的检出限为2.5ng／g，该值低于标准SN／T2430–2010中规定的测定低限（5ng／g）［8］。

2．4精密度试验

对10.0ng／mL的标准溶液进行6次平行测定，测定结果列于表1。由表1可知，测定结果的相对标准偏差为0.92%，表明该法精密度良好。

2．5回收试验

采用在空白样品中添加标准溶液的方法进行回收试验。准确称取相同的空白辣椒试样3份，分别加入5.0，12.0，20.0ng／mL3个不同水平的罗丹明B标准溶液，与样品本底同时进行提取处理和测定，回收试验结果见表2。由表2可知，在添加质量浓度为5.0～20.0ng／mL时罗丹明B的回收率为94.7%～103.3%，相对标准偏差在0.72%～1.50%之间。回收率测定结果符合《实验室质量控制规范食品理化检测》［10］中的要求。

3结语

用HPLC法测定辣椒中的罗丹明B，通过对样品前处理方法进行改进，对流动相条件进行合理优化，减低了检出限，提高了回收率。该方法操作简便、快速，准确度、灵敏度高，适用于辣椒中非法添加物罗丹明B的日常检测，便于在检测领域推广应用。