(一)方法原理

光度法测定铁的显色剂很多，其中邻二氮菲是测定微量铁的高灵敏度和高选择性试剂，在pH～2.9的溶液中，与Fe²⁺生成稳定的橙红色螯合物。

其lgK_稳=21.3,摩尔吸收系数ε_515nm=1.1×10⁴。最大吸收波长在515nm处。如果要测Fe³⁺应先用盐酸羟胺NH₂OH·HCl，将Fe^3＋还原为Fe²⁺

2Fe³⁺＋2NH₂OH+2OH^-=2Fe²⁺+N₂↑＋4H₂O

为了使测定满足准确度的要求，必须选择合适的显色条件和测量条件，这些条件主要包括测定波长、显色剂用量、有色溶液稳定性、溶液酸度、干扰因素及消除等。

(二)仪器及试剂

1．仪器

可见分光光度计(或紫外-可见分光光度计)。

2．试剂

铁标准溶液[100.0ug/mL, 10.00um/L用NHFe(SO₄)₂·12H₂O配制，详见有关分光光度法测定铁的标准]；盐酸羟胺(100g/L)；邻二氮菲(1.5g/L)；乙酸钠(1.0mol/L) ;氢氧化钠(1.0mol/L)。

(三)测定条件

1．绘制吸收曲线选择测量波长

移取10.00ug/mL Fe^3＋标准溶液于50mL容量瓶中，加入1mL盐酸羟胺溶液，摇匀，放置2min后，加入2mL邻二氮菲溶液，5mL乙酸钠溶液，用纯水稀释至标线，摇匀。另取一容量瓶平行作为试剂空白，仅不加铁标准溶液，其余相同。用2cm吸收池，以试剂空白为参比，在440～540nm，每隔10nm测量一次吸光度，在吸收峰值附近每隔5 nm测量一次(改变波长时，必须重新调节参比溶液吸光度至零)。以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，最大吸光度对应的波长为最大吸收波长λmax以此作为测量波长。

2．有色溶液稳定性试验

取2个容量瓶，同1．方法配制铁-邻二氮菲有色溶液和试剂空白溶液，放置2 min后，立即以试剂空白为参比，在选定的波长下测定吸光度，以后隔10、20、30、60、120 (min)测定一次吸光度，绘制吸光度-时间曲线。

3．显色剂用量试验

在6个50mL容量瓶中，各加入10.00ug/mL Fe^2＋标准溶液5.00ML，1mL盐酸羟胺溶液，摇匀。分别加入0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0(mL)邻二氮菲溶液，5mL乙酸钠溶液，用纯水稀释至标线，摇匀。用2cm吸收池，以试剂空白为参比，在选定的波长下测定吸光度。绘制吸光度-显色剂用量曲线。

4.溶液pH值的影响

在6个50mL,容量瓶中，各加入10.00ug/mL Fe²⁺标准溶液5.00mL，1mL盐酸羟胺溶液，摇匀，再分别加入2mL邻二氮菲溶液，摇匀。用吸量管分别加入1mol/L的氢氧化钠溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5(mL)，用纯水稀至标线，摇匀。用精密pH试纸(或酸度计)测定各溶液的pH值。用2cm吸收池，以纯水为参比，在选定波长下测定吸光度，绘制吸光度-pH值曲线。

从以上绘制的曲线，确定合适的显色时间、显色剂用量及pH值范围。

(四)工作曲线绘制及铁含量的测定

1．工作曲线的绘制

于6个50ML容量瓶中，各加入10.00ug/mL Fe²⁺标准溶液0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00(mL)、1mL盐酸羟胺溶液，摇匀。再分别加入2mL邻二氮菲，5mL乙酸钠溶液，用纯水稀释至标线，摇匀。用2cm池，以试剂空白为参比，在选定波长下测定溶液的吸光度。绘制工作曲线，计算回归方程和相关系数。

2．铁含量测定

待测样品溶液应经过预处理，排除共存干扰组分的影响。吸取适量(吸光度落在工作曲线中部为宜)待测溶液，按1．同样步骤显色，测定吸光度，用回归方程求得铁的含量。